Page 90 - วารสารการแพทย์แผนไทย ปีที่ 20 ฉบับที่ 2 พฤษภาคม-สิงหาคม 2565

288 วารสารการแพทย์แผนไทยและการแพทย์ ทางเลือก ปีที่ 20 ฉบับที่ 2 พฤษภาคม-สิงหาคม 2565

96 well plate ปริมาตร 20 ไมโครลิตร จากนั้นท�าตาม ที่อุณหภูมิ 4 องศาเซลเซียส การเตรียมไฮโดรคลอริก
ขั้นตอนการทดสอบตามวิธีที่ใช้ทดสอบสารละลาย ความเข้มข้น 4 มิลลิโมลาร์ปิเปตกรดไฮโดรคลอริก

มาตรฐานโทรลอกซ์ และกรดแอสคอร์บิก น�าค่าการ 0.0033 มิลลิลิตร ปรับปริมาตรด้วยน�้ากลั่น 10
ดูดกลืนแสงความยาวคลื่นที่วัดได้ที่ 734 นาโนเมตร มิลลิลิตร เพื่อไปละลายทีพีทีซีความเข้มข้น 10 มิลลิ
ท�าการค�านวณร้อยละ radical scavenging ค�านวณ โมลาร์

ค่าความเข้มข้นของสารที่สามารถยับยั้งปฏิกิริยาไป การเตรียมสารมาตรฐานเฟอร์รัสซัลเฟต 2
ครึ่งหนึ่ง (IC 50) เปรียบเทียบกับสารมาตรฐานกรด มิลลิกรัมต่อมิลลิลิตร เตรียมโดยชั่งเฟอร์รัสซัลเฟต
แอสคอร์บิก และโทรลอกซ์จากผลการทดลองที่ได้ 0.02 กรัม ปรับปริมาตรด้วยน�้ากลั่น 10 มิลลิลิตร ใน

โดยค�านวณหาร้อยละ radical scavenging จาก ขวดปริมาตร การสร้างกราฟมาตรฐานเฟอร์รัสซัลเฟต
สมการ น�าสารละลายมาตรฐานเฟอร์รัสซัลเฟต 2 มิลลิกรัมต่อ
% Radical scavenging activity = [A control- มิลลิลิตร มาเจือจางด้วยน�้ากลั่นให้มีความเข้มข้นเป็น

A sample/A control] 5 100 0.4, 0.8, 1.2 และ 1.6 มิลลิกรัมต่อมิลลิลิตร ปิเปตใส่
A control = ค่าการดูดกลืนแสงของ ABTS ในหลอดทดลอง ปริมาตร 1 มิลลิลิตร น�าทุกหลอด

A sample = ค่าการดูดกลืนแสงของตัวอย่าง มาเติม FRAP reagent 1 มิลลิลิตร ลงในสารละลาย
มาตรฐานที่เตรียมไว้ ทิ้งไว้ 4 นาที น�าไปวัดค่าการดูด
8. ก�รวิเคร�ะห์คว�มส�ม�รถในก�รเป็นส�ร กลืนแสงที่ความยาวคลื่น 593 นาโนเมตร ด้วยเครื่อง
ต้�นอนุมูลอิสระด้วยวิธี FRAP assay [19] UV-Vis spectrophotometer โดยท�าการทดลอง

วิธีการทดสอบดัดแปลงตามวิธีของ Satsea, et ตัวอย่างละ 3 ครั้ง

[19]
al การเตรียมสารละลาย FRAP reagent เตรียม การวิเคราะห์ฤทธิ์ต้านอนุมูลอิสระด้วยวิธี
เฟอร์ริกคลอไรด์ความเข้มข้น 20 มิลลิโมลาร์ โดยชั่ง FRAP ในสารสกัดเห็ดระโงก ชั่งสารสกัดตัวอย่าง
เฟอร์ริกคลอไรด์มา 0.054 กรัม ละลายในน�้ากลั่น 10 มาตัวอย่างละ 0.01 กรัม มาละลายในตัวท�าละลายที่

มิลลิลิตร และเตรียมทีพีทีซีความเข้มข้น 10 มิลลิโมลาร์ ใช้ในการสกัดปริมาตร 10 มิลลิลิตร เจือจางในตัวท�า
โดยชั่งทีพีทีซีมา 0.031 กรัม ละลายในกรดไฮโดรคลอริก ละลายที่ใช้ในการสกัดให้มีความเข้มข้นเป็น 0, 0.1,
10 มิลลิลิตร (ที่อุณหภูมิ 50 องศาเซลเซียส) ผสม 0.2, 0.3, 0.4 และ 0.5 มิลลิกรัมต่อมิลลิลิตร ปิเปต

เฟอร์ริกคลอไรด์ความเข้มข้น 20 มิลลิโมลาร์ และ ปริมาตร 1 มิลลิลิตรใส่ในหลอดทดลองจากนั้นท�า
ทีพีทีซีความเข้มข้น 10 มิลลิโมลาร์ ด้วยแอซิเตต ตามขั้นตอนการเตรียมสารมาตรฐานเฟอร์รัสซัลเฟต
บัพเฟอร์ 100 มิลลิลิตรจากนั้นเติมน�้ากลั่น 12 มิลลิลิตร

(เก็บที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียส) การเตรียม 9. สถิติสำ�หรับวิเคร�ะห์ข้อมูล
แอซิเตต บัพเฟอร์ความเข้มข้น 300 มิลลิโมลาร์ pH การวิเคราะห์ข้อมูลใช้สถิติพื้นฐาน ได้แก่ การ

3.6 ชั่งโซเดียมแอซิเตต จ�านวน 1.8 กรัม และเติม หาร้อยละ (%) การหาค่าเฉลี่ย (Mean) การหาค่าส่วน
กรดแกลเชียลแอซิติก 8 มิลลิลิตร ปรับปริมาตรด้วย เบี่ยงเบนมาตรฐาน (S.D.) ด้วยโปรแกรมไมโครซอฟต์
น�้ากลั่นให้ครบ 500 มิลลิลิตร ปรับ pH ให้ได้ 3.6 เก็บ เอ็กเซล (microsoft excel) และค�านวณค่าความ