Page 89 - วารสารการแพทย์แผนไทย ปีที่ 20 ฉบับที่ 2 พฤษภาคม-สิงหาคม 2565

J Thai Trad Alt Med Vol. 20 No. 2 May-Aug 2022 287

เห็ดระโงก น�าสารสกัดตัวอย่างมาตัวอย่างละ 0.01 เข้มข้นเป็น 0, 0.005, 0.010, 0.015, 0.020, 0.025
กรัม มาละลายด้วยตัวท�าละลายที่ใช้ในการสกัด และ 0.030 มิลลิกรัมต่อมิลลิลิตร ปิเปตปริมาตร

ปริมาตร 10 มิลลิลิตร น�าสารสกัดที่เตรียมได้มาเจือ 20 ไมโครลิตร ใส่ในภาชนะที่ 1 และเตรียมโดยชั่ง
จางด้วยตัวท�าละลายที่ใช้ในการสกัดให้มีความเข้ม โทรลอกซ์ 0.0025 กรัม ละลายในเอทานอลและปรับ
ข้นเป็น 0, 0.4, 0.8 และ 1.20 มิลลิกรัมต่อมิลลิลิตร ปริมาตรให้ครบ 5 มิลลิลิตร ในขวดปรับปริมาตร เจือ

ปิเปตปริมาตร 0.2 มิลลิลิตรใส่ในหลอดทดลอง จากนั้น จางด้วยเอทานอลให้มีความเข้มข้น 0, 0.005, 0.010,
ท�าตามขั้นตอนการ เตรียมสารละลายมาตรฐานกรด 0.020, 0.025 และ 0.030 มิลลิกรัมต่อมิลลิลิตร ปิเปต
แทนนิก น�าค่าการดูดกลืนแสงความยาวคลื่นที่วัดได้ที่ ปริมาตร 20 ไมโครลิตร ใส่ในภาชนะที่ 1 จากนั้นเติม

750 นาโนเมตรของตัวอย่าง หาปริมาณสารประกอบ สารละลาย ABTS ลงไปในสารละลายมาตรฐานทั้ง 2
แทนนินจาก กราฟมาตรฐานกรดแทนนิก ที่เตรียมไว้ 280 ไมโครลิตร เขย่าผสมให้เข้ากัน ทิ้งไว้
ในที่มืดเป็นเวลา 4 นาที แล้วน�าไปวัดค่าการดูดกลืน
7. ก�รทดสอบฤทธิ์ต้�นอนุมูลอิสระด้วยวิธี แสงที่ความยาวคลื่นที่วัดได้ที่ 734 นาโนเมตร ท�าการ
ABTS assay [18] ทดลองซ�้า 3 ครั้ง แล้วหาค่าเฉลี่ย ด้วยเครื่อง Micro-

วิธีการทดสอบดัดแปลงตามวิธีของ Seekhaw, plate Reader น�าค่าการดูดกลืนแสงที่ความยาวคลื่น
[18]
et al เตรียมสารละลาย ABTS ความเข้มข้น 7 ที่วัดได้ที่ 734 นาโนเมตร ท�าการค�านวณร้อยละ radi-
มิลลิโมลาร์ และสารละลายโพแทสเซียมเปอร์ซัลเฟต cal scavenging ค�านวณค่าความเข้มข้นของสารที่

(K 2S 2O 8) ความเข้มข้น 2.45 มิลลิโมลาร์ ผสมกันด้วย สามารถยับยั้งปฏิกิริยาไปครึ่งหนึ่ง (IC 50)
อัตราส่วน 1:2 บ่มทิ้งไว้ 12-16 ชั่วโมง แล้วน�าไปวัดค่า การวิเคราะห์ความสามารถในการเป็นสารต้าน

การดูดกลืนแสงให้อยู่ในช่วง 0.7 ± 0.02 ก่อนน�าไปใช้ อนุมูลอิสระในสารสกัดหยาบเห็ดระโงก น�าสารสกัด
ต่อไป มาตัวอย่างละ 0.01 กรัม ละลายด้วยตัวท�าละลายที่
การเตรียมสารละลายมาตรฐานกรดแอสคอร์- ใช้ในการสกัดปริมาตร 1 มิลลิลิตร เจือจางด้วยตัวท�า

บิก และโทรลอกซ์เข้มข้น 0.05 มิลลิกรัมต่อมิลลิลิตร ละลายที่ใช้ในการสกัดให้มีความเข้มข้นเป็น 0, 0.5,
ปริมาตร 5 มิลลิลิตร เจือจางด้วยเอทานอลให้มีความ 1.0, 1.5, 2.0 และ 2.5 มิลลิกรัมต่อมิลลิลิตร ปิเปตใส่

ตารางที่ 1 ปริมาณร้อยละของผลผลิตของสารสกัดหยาบเห็ดระโงกขาว (A. princeps) และเห็ดระโงกเหลือง (A. javanica)
ชนิดเห็ด ตัวทำาละลาย ลักษณะสีของสารสกัด ร้อยละผลผลิต

เห็ดระโงกขาว เมทานอล สีส้มอมเหลือง 16.50
เอทานอล สีเหลืองอมน�้าตาล 9.51
น�้าร้อน สีน�้าตาลอมด�า 26.52

เห็ดระโงกเหลือง เมทานอล สีส้มอมเหลือง 23.44
เอทานอล สีน�้าตาลอ่อน 12.79
น�้าร้อน สีน�้าตาลอมด�า 28.97