Page 158 - Acrobat J Trad-21-3-2566

J Thai Trad Alt Med Vol. 21 No. 3 Sep-Dec 2023 641

คู่คงวิริยพันธุ์ คณะแพทยศาสตร์ มหาวิทยาลัย การเจริญเติบโตของแต่ละเซลล์ในตู้บ่มเป็นเวลา 24
ขอนแก่น จังหวัดขอนแก่น ท�าการทดสอบโดยวิธี ชั่วโมง จากนั้นเติมสารสกัดที่ผสมอยู่ในอาหารเลี้ยง

Sulforhodamine B (SRB) assay [25-26] ส�าหรับเซลล์ เซลล์ที่ความเข้มข้นสุดท้ายเท่ากับ 100, 50, 10 และ
KATO III และ SW480 ท�าการเพาะเลี้ยงในอาหาร 1 µg/mL หลุมละ 100 µL โดยในแต่ละความเข้ม
เลี้ยงเซลล์ชนิด RPMI-1640 (ยี่ห้อ Gibco, ประเทศ ข้นจะท�าซ�้า 4 หลุมแล้วน�าไปบ่มต่อในตู้บ่มเป็นเวลา

สหรัฐอเมริกา) ที่เติม 10% Fetal bovine serum 72 ชั่วโมง จากนั้นท�าการล้างเซลล์ด้วย phosphate
(FBS) (ยี่ห้อ Biochem, ประเทศเยอรมัน) และ 1% buffer saline (PBS) (ยี่ห้อ Gibco, ประเทศอังกฤษ)
penicillin-streptomycin (P/S) (ยี่ห้อ Gibco, ที่ปราศจากเชื้อหลุมละ 200 µL แล้วดูดออก เติม

ประเทศสหรัฐอเมริกา) เซลล์ LS 174T ท�าการเพาะ อาหารเลี้ยงเซลล์ใหม่ลงไปหลุมละ 200 µL บ่มต่อ
เลี้ยงในอาหารเลี้ยงเซลล์ชนิด Minimum Essential อีกเป็นเวลา 72 ชั่วโมง หลังจากนั้นท�าการตรึงเซลล์
Media (MEM) (ยี่ห้อ Gibco, ประเทศสหรัฐอเมริกา) ที่มีชีวิตด้วย 40% trichloroacetic acid (TCA)

ที่เติม 10% FBS และ 1% P/S เซลล์ Hep G2 ท�าการ (ยี่ห้อ Merck, ประเทศเยอรมนี) ที่เย็นจัดหลุมละ
เพาะเลี้ยงในอาหารเลี้ยงเซลล์ชนิด MEM ที่เติม 10% 100 µL บ่มต่อในตู้เย็นเป็นเวลา 1 ชั่วโมง จากนั้น

FBS, 1% P/S และ 10 mM Hepes (ยี่ห้อ Gibco, ท�าการล้างกรดด้วยน�้าและท�าการย้อมเซลล์ด้วยสี
ประเทศไต้หวัน) และสุดท้ายเซลล์ KKU-M156 ท�าการ 0.4% SRB (ยี่ห้อ Sigma, ประเทศสหรัฐอเมริกา)
เพาะเลี้ยงในอาหารเลี้ยงเซลล์ชนิด HAM’s F12 (ยี่ห้อ หลุมละ 50 µL ตั้งทิ้งไว้ที่อุณหภูมิห้อง 30 นาที ท�าการ

Gibco, ประเทศสหรัฐอเมริกา) เติมด้วย 10% FBS, ล้างสีส่วนเกินออกด้วย 1% acetic acid (ยี่ห้อ RCI
1% P/S, 1% Sodium pyruvate (C 3H 3NaO 3) (ยี่ห้อ Labscan, ประเทศไทย) ทิ้งเพลทให้แห้งแล้วละลาย

Gibco, ประเทศจีน) และ 12.5 mM Hepes นอกจาก สีด้วย 10 mM trisma base (ยี่ห้อ Sigma, ประเทศ
นี้ยังท�าการทดสอบกับเซลล์ปกติชนิด HaCaT (CLS สหรัฐอเมริกา) หลุมละ 100 µL น�าไปวัดค่าการดูด
No.300493) เพื่อใช้ในการค�านวณค่า Selectivity กลืนแสงด้วยเครื่อง microplate reader (ยี่ห้อ Ther-

index (SI) ซึ่งถูกเพาะเลี้ยงในอาหารเลี้ยงเซลล์ชนิด mo Scientific, ประเทศออสเตรเลีย) ที่ความยาวคลื่น
Dulbecco’s Modified Eagle Medium (DMEM) 492 nm น�าค่าที่ได้มาค�านวณ % growth inhibition
(ยี่ห้อ Gibco, ประเทศสหรัฐอเมริกา) เติมด้วย 10% และหาค่า IC 50 (ค่าความเข้มข้นที่ยับยั้งการเพิ่มจ�านวน

FBS และ 1% P/S โดยเซลล์ทั้งหมดจะถูกเพาะเลี้ยง เซลล์ได้ร้อยละ 50)
ภายในตู้บ่มเพาะ 5% CO 2 ที่อุณหภูมิ 37˚ซ OD control – OD sample

สารสกัดจะถูกละลายใน Dimethyl sulfoxide Inhibition (%) = OD control ´100

(DMSO) (ยี่ห้อ RCI Labscan, ประเทศไทย) ที่ การสรุปว่าสารสกัดสมุนไพรมีฤทธิ์ต้านเซลล์
ปราศจากเชื้อเตรียมที่ความเข้มข้น 20 mg/mL ท�าการ มะเร็งที่ดีจะต้องมีค่า IC 50 น้อยกว่า 30 µg/mL สาร
เพาะเลี้ยงเซลล์ลงใน 96-well microplate หลุมละ สกัดที่มีฤทธิ์ปานกลางต้องมีค่า IC 50 น้อยกว่า 50 µg/
100 µL โดยให้มีความหนาแน่นของเซลล์ตามอัตรา mL และสารบริสุทธิ์ (pure compound) ต้องมีค่า