Page 98 - วารสารการแพทย์แผนไทย ปีที่ 21 ฉบับที่ 2

314 วารสารการแพทย์แผนไทยและการแพทย์ ทางเลือก ปีที่ 21 ฉบับที่ 2 พฤษภาคม-สิงหาคม 2566

เป็นเวลา 8-12 ชั่วโมง (วัดความขุ่นที่ค่าการดูดกลืน 2.2) การทดสอบในระบบที่มีเอนไซม์
แสงความยาวคลื่น 600 นาโนเมตร ให้มีปริมาณเชื้อ กระตุ้น: ใช้สารละลายผสมของ Aroclor 1254-in-

9
มากกว่า 1 5 10 cell/mL) ท�าการทดสอบในระบบที่ duced male Sprague-Dawley rat liver และ
ไม่มีและมีเอนไซม์กระตุ้น Cofactor-I หรือเรียกว่า S9 mix เป็นตัวกระตุ้น
2.1) การทดสอบในระบบที่ไม่มีเอนไซม์ ท�าการทดสอบโดยวิธีการเช่นเดียวกับการทดสอบใน

กระตุ้น: ผสมสารทดสอบปริมาตร 100 ไมโครลิตร, ระบบที่ไม่มีเอนไซม์กระตุ้น แต่ใช้ S9 mix ปริมาตร
บัฟเฟอร์ 0.5 M NaPO 4-KCl, pH 7.4 ปริมาตร 500 500 ไมโครลิตร แทนบัฟเฟอร์ 0.5 M NaPO 4-KCl,
ไมโครลิตร และแบคทีเรียปริมาตร 100 ไมโครลิตร pH 7.4 และใช้ positive control (Table 1) เมื่อครบ

กับ Top agar ปริมาตร 2 มิลลิลิตร (ใช้อาหารที่มี ก�าหนดเพาะเลี้ยง อ่านผลการทดสอบ
ส่วนผสมของ L-histidine กับ D-biotin ส�าหรับเชื้อ 2.3) การอ่านผลและประเมินผลการ
S. typhimurium และอาหารที่มีส่วนผสมของ tryp- ทดสอบ: การทดสอบต้องไม่พบการตกตะกอนหรือ

tophan ส�าหรับเชื้อ E. coli อุ่นอยู่ที่อุณหมูมิ 45˚ซ.) เกิดการขุ่นบนหน้าอาหารเลี้ยงเชื้อเมื่อสังเกตด้วย
แล้วเทลงบนอาหาร MGA จากนั้นปล่อยให้อาหาร ตาเปล่า และท�าการตรวจสอบความผิดปกติของ

แข็งตัว และน�าเพลทไปบ่มที่อุณหภูมิ 37 ± 2˚ซ. เป็น background lawn ด้วยกล้องจุลทรรศน์แบบหัว
เวลา 50 ± 2 ชั่วโมง ท�าการทดสอบความเข้มข้นละ 3 กลับ (inverted microscope) น�าเพลทมานับจ�านวน
ซ�้า ใช้น�้าปราศจากเชื้อแทนสารทดสอบส�าหรับ nega- โคโลนีกลายพันธุ์ (revertant colony) ด้วยเครื่อง

tive (solvent or vehicle) control และใช้ positive บันทึกภาพและนับโคโลนีแบบอัตโนมัติ สารทดสอบ
control (Table 1) เมื่อครบก�าหนดเพาะเลี้ยง อ่านผล ที่มีฤทธิ์ก่อกลายพันธุ์จะพบความสัมพันธ์ระหว่าง

การทดสอบ ปริมาณสารทดสอบกับจ�านวนโคโลนีกลายพันธุ์ re-

Table 1 Positive controls for bacterial reverse mutation assay

Chemicals Strains Concentration (µg/mL)

Absence of metabolic activation system
2-Nitrofluorene (2-NF) TA98 2
Sodium azide (SA) TA100 และ TA1535 0.5
Acridine mutagen ICR191 (ICR-191) TA1537 0.5
4-Nitroquinoline-N-oxide (4NQNO) WP2 0.5
Presence of metabolic activation system
4-nitro-o-phenylenediamine (NPD) TA99 และ TA100 20
4-Nitroquinoline-N-oxide (4NQNO) TA1535 12.5
2-Nitrofluorene (2-NF) TA1537 25
2-Aminoanthracene (2-AA) WP2 20