Page 97 - วารสารการแพทย์แผนไทย ปีที่ 21 ฉบับที่ 2

J Thai Trad Alt Med Vol. 21 No. 2 May-Aug 2023 313

ของเชื้อแบคทีเรียที่ใช้ทดสอบในแต่ละด้าน ได้แก่ mids: ดูการต้านทานยา ampicillin (ampicillin
1.1) ความต้องการกรดอะมิโนฮีสทิดีน resistance) แบคทีเรียที่มี R-factor plasmids จะ

ของเชื้อ S. typhimurium ทั้ง 4 สายพันธุ์: สังเกต ดื้อต่อยาเมื่อท�าการทดสอบด้วย paper disc ที่มี 8
การเจริญของเชื้อบนอาหาร Minimal glucose มิลลิกรัมต่อมิลลิลิตร ampicillin วางบนเพลทที่มี
agar (MGA; Vogel-Bonner medium E, 40% เชื้อแบคทีเรียในอาหาร MGA ที่มีส่วนผสมของกรด

glucose และ 1.5% agar) และอาหารเลี้ยงเชื้อที่ อะมิโนดังกล่าวข้างต้น แล้วน�าเพลทไปบ่มที่อุณหภูมิ
คลุมผิวเพลทด้วย Top agar (0.6% agar และ 37˚ซ. เป็นเวลา 24 ชั่วโมง สังเกตผลการเจริญของ
0.5% NaCl) ปริมาตร 2 มิลลิลิตร ที่มีส่วนผสมของ เชื้อรอบแผ่นทดสอบส�าหรับสายพันธุ์ที่มี R-factor (S.

0.1 M L-histidine ปริมาตร 100 ไมโครลิตร และ/ typhimurium TA98 และ TA100) จะไม่เกิดโซนใส
หรือ 1 mM D-biotin ปริมาตร 100 ไมโครลิตร บ่ม (clear zone) คือมีแบคทีเรียเจริญบริเวณรอบแผ่น
ที่อุณหภูมิ 37˚ซ. เป็นเวลา 24 ชั่วโมง แบคทีเรีย ทดสอบ

S. typhimurium ทั้ง 4 สายพันธุ์ ที่ใช้ต้องเจริญ 1.5) การตรวจสอบ urvB mutation: ดู
ได้ดีในอาหารที่มีส่วนผสมของ L-histidine และ ความไวของเชื้อต่อ mitomycin (sensitivity to

D-biotin mitomycin) เมื่อท�าการทดสอบโดยใช้ paper disc
1.2) ความต้องการกรดอะมิโนทริปโตเฟน ที่มี 0.2 ไมโครกรัม mitomycin วางบนเพลทที่มีเชื้อ
ของเชื้อ E. coli: สังเกตการเจริญของเชื้อบนอาหาร แบคทีเรียในอาหาร MGA ที่มีส่วนผสมของกรดอะ

MGA ที่มีส่วนผสมของ 0.05 mM tryptophan บ่ม มิโนดังกล่าวข้างต้น แล้วน�าเพลทไปบ่มที่อุณหภูมิ
ที่อุณหภูมิ 37˚ซ. เป็นเวลา 24 ชั่วโมง เชื้อ E. coli ที่ 37˚ซ. เป็นเวลา 24 ชั่วโมง สังเกตผลการเจริญของเชื้อ

ใช้ต้องเจริญได้ดีบนอาหารนี้ รอบแผ่นทดสอบ โดยแบคทีเรียที่มี urvB mutation
1.3) การตรวจสอบ rfa mutation: ดู จะเกิดโซนใส (clear zone) คือไม่มีแบคทีเรียเจริญ
ความไวของเชื้อต่อ crystal violet (sensitivity to บริเวณรอบแผ่นทดสอบ

crystal violet) เมื่อท�าการทดสอบโดยใช้ paper 2) การทดสอบฤทธิ์ก่อกลายพันธุ์ในเชื้อ
disc ที่มี 0.1% crystal violet วางบนเพลทที่มีเชื้อ แบคทีเรีย
S. typhimurium ในอาหาร MGA ที่มีส่วนผสมของ การทดสอบฤทธิ์ก่อกลายพันธุ์ใช้วิธี plate

0.5 mM L-histidine กับ 0.5 mM D-biotin กับเพลท incorporation ท�าการทดสอบเจลสารสกัดรากทอง
ที่มีเชื้อ E. coli ในอาหาร MGA ที่มีส่วนผสมของ 0.5 พันชั่งที่ 6 ระดับความเข้มข้น โดยหาขนาดความเข้ม
mM tryptophan น�าเพลทไปบ่มที่อุณหภูมิ 37˚ซ. ข้นที่เหมาะสมในการทดสอบ ซึ่งเป็นความเข้มข้นที่

เป็นเวลา 24 ชั่วโมง อ่านผลการทดสอบโดยแบคทีเรีย สูงสุดของสารทดสอบที่ละลายอย่างสมบูรณ์และไม่
ที่มี rfa mutation จะเกิดโซนใส (clear zone) คือไม่มี เกิดตะกอน จากนั้นเตรียมสารทดสอบในความเข้ม

แบคทีเรียเจริญบริเวณรอบแผ่นทดสอบ โดยโซนใสมี ข้นที่เจือจางแบบ half log อีก 5 ความเข้มข้น ใช้
ขนาดเส้นผ่านศูนย์กลางประมาณ 12-14 มิลลิเมตร แบคทีเรียทดสอบแต่ละชนิดที่เตรียมใหม่โดยการ
1.4) การตรวจสอบการมี R-factor plas- เพาะเลี้ยงแบบเขย่าในอาหารเหลวที่อุณหภูมิ 37˚ซ.