Page 112 - วารสารการแพทย์แผนไทย ปีที่ 20 ฉบับที่ 3 กันยายน-ธันวาคม 2565

526 วารสารการแพทย์แผนไทยและการแพทย์ ทางเลือก ปีที่ 20 ฉบับที่ 3 กันยายน-ธันวาคม 2565

ทดลอง ปริมาตร 10 มิลลิลิตร น�าเก็บที่ตู้บ่มควบคุม หมอเมืองล้านนา หยดลง 96-well plate ปริมาตร 50
อุณหภูมิ โดยควบคุมสภาวะเร่งที่อุณหภูมิสภาวะ µL และเติม 2% อะลูมิเนียมไตรคลอไรด์ ปริมาตร

อุณหภูมิ 4, 25 และ 40˚ซ. โดยเก็บในโถควบคุม 50 µL ผสมให้เข้ากันแล้วตั้งทิ้งไว้ที่อุณหภูมิห้อง
ความชื้น (desiccators) ที่บรรจุสารละลายอิ่ม เป็นเวลา 15 นาที น�าไปวัดค่าการดูดกลืนแสง (OD)
ตัวยิ่งยวดของ sodium chloride ซึ่งท�าให้เกิด ที่ความยาวคลื่น 435 nm ด้วยเครื่อง Microplate

[10]
ความชื้นสัมพัทธ์ 75% ± 5 เป็นระยะเวลา 0, 1, 2, reader ใช้สารเควอซิติน (quercetin) เป็นสาร
3, 4, 5, 6 และ 7 วัน [11-12] จากนั้นมาบันทึกลักษณะสี มาตรฐาน (ความเข้มข้น 0.8125, 1.625, 3.125, 6.25,

การเกิดตะกอน และความเป็นกรดด่าง 12.5, 25, และ 50 µg/mL) ปริมาณฟลาโวนอยด์รวม
2.3 กำรหำปริมำณสำรประกอบฟีนอลิกรวม หาได้จากการน�าค่าการดูดกลืนแสงของสารตัวอย่าง

(Total phenolic content) น�ายาต้มแก้ไข้ตัว เทียบกับกราฟมาตรฐานของสารเควอซิติน ปริมาณที่
ร้อนต�ารับหมอเมืองล้านนา หยดลง 96-well plate ได้แสดงในหน่วย mg QE/g extract ดัดแปลงจาก

ปริมาตร 20 µL เติมสารละลาย Folin-Ciocalteau’s การศึกษาของ Mohamed El-Sayed M [13]
phenol reagent 20 µL ตั้งไว้ในที่มืดเป็นเวลา 5 นาที 2.5 กำรทดสอบฤทธิ์ต้ำนอนุมูลอิสระ (free
จากนั้นเติมสารละลายโซเดียมคาร์บอเนตความเข้ม radical scavenging activity) ด้วยวิธี DPPH

ข้น 7.5% ปริมาตร 100 µL แล้วปรับปริมาตรด้วย assay (2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl) โดยเตรียม

น�้ากลั่นจนครบ 300 µL ตั้งไว้ที่อุณหภูมิห้องในที่มืด สารละลาย DPPH 0.4 mM ละลายในเอทานอล
เป็นเวลา 30 นาที น�าไปวัดค่าการดูดกลืนแสง (OD) จากนั้นท�าการทดสอบสารตัวอย่าง โดยผสมยาต้ม
ที่ความยาวคลื่น 765 nm ด้วยเครื่อง Microplate แก้ไข้ตัวร้อนต�ารับหมอเมืองล้านนา น�ามาเจือจาง

reader ค�านวณหาปริมาณฟีนอลิกรวม จากการน�า ด้วยน�้ากลั่น ให้ได้ความเข้มข้น 0.3125, 0.625, 1.25,
ค่าการดูดกลืนแสงของสารตัวอย่างเทียบกับกราฟ 2.5 และ 5% w/w ปริมาตร 100 µL กับสารละลาย

มาตรฐานของสารละลายกรดแกลลิก (gallic acid) DPPH 100 µL ใน 96 well plate ตั้งทิ้งไว้ที่มืดเป็น
ความเข้มข้น 5, 10, 20, 40, 80, 160 และ 320 µg/ เวลา 30 นาที วัดค่าการดูดกลืนแสงที่ 517 nm ด้วย

mL ปริมาณที่ได้แสดงในหน่วย mg GAE/g extract เครื่อง Microplate reader โดยใช้โทรลอกซ์ (Tro-
ดัดแปลงจากการศึกษาของ Mohamed El-Sayed M [13] lox) เป็นสารมาตรฐาน จากนั้นน�าค่าการดูดกลืนแสง

2.4 กำรหำปริมำณฟลำโวนอยด์รวม (total ที่ได้มาค�านวณหาเปอร์เซ็นต์การยับยั้งอนุมูลอิสระ
[14]
flavonoid content) น�ายาต้มแก้ไข้ตัวร้อนต�ารับ (% Radical Scavenging) จากสมการ

(Abscontrol – Abssample)
% inhibition DPPH = 5 100
*
(Abscontrol)
โดย Abscontrol คือค่าดูดกลืนแสงของ DPPH ที่ไม่ได้ใส่ยาต้มแก้ไข้ตัวร้อนต�ารับหมอเมืองล้านนา
*
Abssample คือค่าดูดกลืนแสงของ DPPH ที่ใส่ยาต้มแก้ไข้ตัวร้อนต�ารับหมอเมืองล้านนา
*