Page 183 - Acrobat J Trad-21-3-2566

666 วารสารการแพทย์แผนไทยและการแพทย์ ทางเลือก ปีที่ 21 ฉบับที่ 3 กันยายน-ธันวาคม 2566

ต้านอนุมูลอิสระที่ท�าให้ความเข้มข้นของ DPPH ลด ความเข้มข้น 0.7810, 1.5625, 3.125, 6.25, 12.5, 25,
ลง 50% โดยสร้างกราฟระหว่างความเข้มข้นของสาร 50, 100 µg/ml ซึ่งละลายอยู่ในเอทานอล บ่มในที่มืด

ทดสอบกับค่าการยับยั้งอนุมูลอิสระแล้วหาค่า IC 50 ใน ที่อุณหภูมิห้อง เป็นเวลา 30 นาที น�าไปวัดค่าการดูด
การค�านวณความสามารถของสารต้านอนุมูลอิสระจะ กลืนแสงที่ความยาวคลื่น 517 nm ด้วย microplate
เปรียบเทียบค่าของสารทดสอบกับสารมาตรฐาน การ reader จากนั้นน�าค่าดูดกลืนแสงที่ได้ไปค�านวณ

ทดสอบสมบัติการต้านอนุมูลอิสระของสารสกัดด้วย หาค่าการยับยั้งการต้านอนุมูลอิสระและสร้างกราฟ
DPPH โดยเตรียมอนุมูลอิสระ DPPH ความเข้มข้น ระหว่างค่าการยับยั้งอนุมูลอิสระกับความเข้มข้น

2 mM ด้วยตัวท�าละลายเอทานอล ท�าการเจือจาง ของตัวอย่าง เพื่อหาค่าความเข้มข้นของตัวอย่างที่
อนุมูลอิสระ DPPH ให้ได้ค่าการดูดกลืนแสงเท่ากับ สามารถต้านอนุมูลอิสระ DPPH ที่ 50% (IC 50) โดย
0.7 ± 0.03 nm จากนั้นจึงเตรียมสารต้านอนุมูล การทดลองครั้งนี้จะท�าการทดลองซ�้าจ�านวน 3 ครั้ง

อิสระมาตรฐาน ซึ่งในการศึกษาครั้งนี้ใช้ Butylated ต่อ 1 ตัวอย่าง การค�านวณ % การยับยั้งอนุมูลอิสระ
Hydroxytoluene (BHT) วิตามินซี และวิตามินอี ที่ DPPH Radical มีดังนี้

% Inhibition = [(Acontrol - A Sample) / A Control] ´ 100
โดยที่ Acontrol = Absorbance of Control - Absorbance of Control Blank

A sample = Absorbance of Sample - Absorbance of Sample Blank

2.5 การทดสอบสมบัติการต้านอนุมูลอิสระด้วย เอทานอล เพื่อให้ได้ค่าการดูดกลืนแสงที่ 0.7 ± 0.03
วิธี 2,2-Azino-Bis (3-Ethylbenzothiazoline-6- nm เตรียมสารมาตรฐาน Ascorbic Acid, BHT
Sulfonic Acid) หรือ ABTS Assay และ α-Tocopherol ที่ความเข้มข้น 0.625, 1.25,

เป็นวิธีการวัดความสามารถในการฟอก 2.5, 5, 10, 20 และ 40 µg/ml ซึ่งละลายอยู่ในเอทา
•+
สีอนุมูลอิสระเอบีทีเอส (ABTS ,2,2-Azino-bis นอล บ่มไว้ที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 45 นาที จากนั้น
(3-Ethylbenzothiazoline-6-Sulfonic Acid) จึงน�าไปวัดค่าการดูดกลืนแสงที่ความยาวคลื่น 734

Radical) (Figure 2) เป็นสารสังเคราะห์ที่มีสีเขียวปน nm น�าค่าที่ได้ไปค�านวณหาเปอร์เซ็นต์ Scavenging
น�้าเงินสามารถดูดกลืนแสงได้สูงสุดที่ความยาวคลื่น Activity และปริมาณสารต้านอนุมูลอิสระของสาร

734 nm เริ่มจากท�าการเตรียมอนุมูล ABTS ที่ความ สกัดสมุนไพร เพื่อหาค่าความเข้มข้นของตัวอย่างที่
เข้มข้น 7 mM ในน�้า 10 มิลลิลิตร น�ามาท�าปฏิกิริยา สามารถต้านอนุมูลอิสระ ABTS ที่ 50% (IC 50) โดย
กับโพแทสเซียมเปอร์ซัลเฟต 2.45 mM ในน�้า 12.5 การทดลองครั้งนี้จะท�าการทดลองซ�้าจ�านวน 3 ครั้ง

ml ที่อุณหภูมิ 4˚ซ ในที่มืดเป็นเวลา 18 ชั่วโมง เพื่อ ต่อ 1 ตัวอย่าง การค�านวณ % การยับยั้งอนุมูลอิสระ
ให้เกิดอนุมูลอิสระ ABTS จากนั้นน�าไปเจือจางด้วย ABTS Radical ดังนี้

% Inhibition = [(A control - A sample) / A control] ´ 100
โดยที่ A control = Absorbance of control - Absorbance of control blank

A sample = Absorbance of sample - Absorbance of sample blank