Page 182 - Acrobat J Trad-21-3-2566

J Thai Trad Alt Med Vol. 21 No. 3 Sep-Dec 2023 665

2.2 การวิเคราะห์ปริมาณสารฟลาโวนอยด์ด้วย จากสารที่มีคุณสมบัติเป็นสารต้านอนุมูลอิสระท�าให้
วิธี Aluminum Chloride Colorimetric Assay เกิดการเปลี่ยนแปลงเป็น Mo (VI) จากสีเหลือง กลาย

การหาปริมาณฟลาโวนอยด์รวมของสาร เป็นสีน�้าเงินดังสมการปฏิกิริยาต่อไปนี้ การวิเคราะห์
สกัด โดยใช้วิธี Aluminum Chloride Colorimetric หาปริมาณสารประกอบฟีนอลิกสามารถท�าได้โดยใช้
Method อาศัยการเกิดปฏิกิริยาระหว่าง Aluminum กรดแกลลิก (Gallic Acid) เป็นสารมาตรฐานที่ช่วง

Chloride (AlCl 3) จับกับหมู่ Ketone และ Hydroxyl ความเข้มข้น 60-200 µg/ml เตรียมสารตัวอย่างที่
ของสารฟลาโวนอยด์ เกิดเป็นสารประกอบเชิงซ้อน ความเข้มข้น 2 mg/ml ดูดสารตัวอย่างจ�านวน 100
ที่มีสีเหลืองในสภาวะที่เป็นกรด การศึกษาครั้งนี้ใช้ ไมโครลิตร เติมสารละลาย 10% v/v Folin-Ciocalteu

Quercetin เตรียมเป็นสารละลายมาตรฐานที่ความ จ�านวน 200 ไมโครลิตร ผสมให้เข้ากัน บ่มที่อุณหภูมิ
เข้มข้นตั้งแต่ 50-120 µg/ml และเตรียมสารตัวอย่าง ห้องเป็นเวลา 5 นาที เติมสารละลาย 0.7 M Sodium
ที่ความเข้มข้น 2 mg/ml ดูดสารตัวอย่างจ�านวน 100 Carbonate (Na 2Co 3) จ�านวน 800 ไมโครลิตร ตั้งทิ้ง

ไมโครลิตร เติมสารละลาย 10% AlCl 3 จ�านวน 40 ไว้ในที่มืด อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 2 ชั่วโมง น�าไปวัดค่า
ไมโครลิตร ตามด้วย 95% Ethanol จ�านวน 600 การดูดกลื่นแสงที่ความยาวคลื่น 765 nm ด้วยเครื่อง

ไมโครลิตร และสารละลาย 1M Sodium Acetate microplate reader ค�านวณหาปริมาณสารฟีนอลิก
จ�านวน 40 ไมโครลิตร ผสมให้เข้ากัน ตั้งทิ้งไว้ในที่ รวม (TPC) เทียบกับกราฟมาตรฐาน Gallic Acid
มืดที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 40 นาที น�าค่าไปวัดค่า รายงานผลในหน่วย mgE ของ Gallic Acid ต่อกรัม

การดูดกลืนแสงที่ 415 nm ด้วยเครื่อง microplate ของสารสกัดหยาบ [mg Gallic Acid Equivalent
reader ค�านวณหาปริมาณสารฟลาโวนอยด์รวม เทียบ (GAE)/g of Crude Extract] ซึ่งปริมาตรที่ใช้ใน

กับกราฟมาตรฐาน Quercetin รายงานผลในหน่วย แต่ละกลุ่มทดสอบ
mgE ของ Quercetin ต่อกรัม ของสารสกัดหยาบ 2.4 การทดสอบสมบัติการต้านอนุมูลอิสระด้วย
[mg Quercetin Equivalent (QE)/g of Crude วิธี 2,2-Diphenyl-Picrylhydrazyl หรือ DPPH

Extract] ซึ่งปริมาตรที่ใช้ในแต่ละกลุ่มทดสอบ Assay
2.3 การวิเคราะห์ปริมาณสารฟีนอลิกด้วยวิธี เป็นหนึ่งในวิธีการที่ใช้กันอย่างกว้างขวาง
Folin-Ciocateu Assay ส�าหรับการศึกษาฤทธิ์ต้านอนุมูลอิสระของสารสกัด

การหาปริมาณฟีนอลิกรวม (PTC) ด้วยวิธี จากพืชเนื่องจากเป็นวิธีที่ท�าได้ง่าย สะดวกและรวดเร็ว
Folin Ciocalteu อาศัยการเกิดปฏิกิริยารีดักชั่นของ (Figure 1) สามารถวัดค่าการดูดกลืนแสงได้ที่
สารประกอบฟีนอลิกในการเปลี่ยนแปลงสารละลาย ความยาวคลื่น 517 nm ซึ่งจะแปรผันกับความเข้ม

Folin-Ciocateu ที่มีสีเหลืองในสถานะที่เป็นด่าง ข้นของ DPPH ดังนั้นการลดลงของความเข้มข้นของ
ให้เป็นสารประกอบเชิงซ้อนสีน�้าเงิน ซึ่งจะสามารถ DPPH บ่งบอกถึงความสามารถในการก�าจัดอนุมูล

วิเคราะห์ปริมาณได้โดยการวัดค่าการดูดกลืนแสงที่ อิสระของสารต้านอนุมูลอิสระ การแสดงผลการศึกษา
765 nm ซึ่งการเปลี่ยนแปลงของสีเกิดจากปฏิกิริยา ความสามารถในการต้านอนุมูลอิสระของสารทดสอบ
ของไอออน Mo (VI) สีเหลืองเมื่อมีการรับอิเล็กตรอน นิยมรายงานเป็นค่า IC 50 ซึ่งหมายถึง ปริมาณสาร