Page 194 - วารสารกรมการแพทย์แผนไทยฯ ปีที่ 20 ฉบับที่ 1
P. 194
174 วารสารการแพทย์แผนไทยและการแพทย์ ทางเลือก ปีที่ 20 ฉบับที่ 1 มกราคม-เมษายน 2565
2. วิธีกำรศึกษำ มคล. 3,3’,5,5’Tetramethylbenzidine (TMB)
การศึกษาครั้งนี้ได้ศึกษาในช่วงวันที่ 12-25 ลงในแต่ละหลุม ทิ้งไว้ 10 นาที ในที่มืด บน plate
มีนาคม 2564 ในจังหวัดสมุทรสาคร ซึ่งค่าระดับ shake เขย่าที่ 400 rpm TMB จะถูกอ็อกซิไดซ์ด้วย
ความเข้มข้นของฝุ่นละเอียด PM 2.5 ได้รับการบันทึก เอนไซม์ horseradish peroxidase ที่อยู่ในส่วนของ
ที่ Station 14t แขวงการทางสมุทรสาคร ต.อ้อมน้อย antibody cocktail เปลี่ยนเป็น TMB ในรูปอ็อกซิ
อ.กระทุ่มแบน สมุทรสาคร และ Station 27t โรงเรียน ไดซ์ จากนั้นเติม 50 มคล. stop solution (4N H SO )
2
4
สมุทรสาครวิทยาลัย ต.มหาชัย อ.เมือง สมุทรสาคร เพื่อหยุดปฏิกิริยา น�าวัดค่า Optical density (OD) ที่
ซึ่งมีค่าสูงสุดอยู่ระหว่าง 23-97 มคก./ลบ.ม. และ 450 nm. ค่าที่ได้แสดงถึงปริมาณ TNF-α และ IL-6
17-130 มคก./ลบ.ม. ตามล�าดับ (ภาพที่ 1) มีขั้นตอน ในเลือด
การศึกษา ดังนี้ 2.3 ผู้เข้าร่วมวิจัยที่มีระดับ TNF-α และ IL-6
2.1 เก็บรวบรวมข้อมูลของผู้เข้าร่วมวิจัยเพศ สูงเกินเกณฑ์ปกติ จะได้รับยาธรณีสัณฑะฆาต ซึ่ง
ชายจ�านวน 15 คน ได้แก่ ข้อมูลทั่วไป ชื่อ อายุ ประวัติ ผ่านมาตรฐานการผลิต GMP ของยาสมุนไพร เลข
โรคประจ�าตัว ประวัติการใช้ยาและการแพ้ยา อุณหภูมิ ทะเบียน G 808/60 จ�านวน 4 แคปซูล/วัน (240 มก./
ร่างกาย ค่าความดันโลหิต น�้าหนัก ส่วนสูง ค่าดัชนี แคปซูล) รับประทาน 1 ครั้งเวลาก่อนนอน เป็นระยะ
มวลกาย เวลา 2 สัปดาห์
2.2 ก่อนเริ่มการทดลอง เก็บตัวอย่างเลือด 2.4 ท�าการตรวจเลือดอีกครั้ง เพื่อวัดระดับ
ของผู้เข้าร่วมวิจัยใน clotted blood tube ปริมาณ TNF-α และ IL-6 ตามวิธีการดังข้อ 2.2
10 มิลลิลิตร เพื่อตรวจวัดระดับ TNF-α และ IL-6 2.5 ท�าการวิเคราะห์ผล
ในเลือด และท�าการปั่นเก็บ serum โดยการหมุน ข้อมูลเชิงคุณภาพ ได้แก่ ประวัติโรคประจ�าตัว
เหวี่ยงที่ 2,000 g เป็นเวลา 10 นาที และท�าการเจือจาง ประวัติโรคประจ�าตัวในครอบครัว ประวัติการใช้ยา
un-diluted serum ด้วย diluent normal saline ท�าการวิเคราะห์จากความถี่ (frequency) และร้อยละ
และวัดปริมาณ TNF-α และ IL-6 โดยใช้เทคนิค (percentage)
quantitative sandwich enzyme immunoas- ข้อมูลเชิงปริมาณ ได้แก่ อายุ ค่าความดันโลหิต
say กล่าวพอสังเขป ดังนี้ เติม serum ที่ได้เจือจาง ดัชนีมวลกาย ระดับTNF-α และ IL-6 ในเลือด ใช้ค่า
50 มคล. ซี่งมี TNF-α และ IL-6 ลงในหลุมของ 96 เฉลี่ย (mean) และส่วนเบี่ยงเบนมาตรฐาน (standard
well plate ที่เคลือบด้วย monoclonal antibody ที่ deviation) โดยใช้โปรแกรมส�าเร็จรูป statistical
เฉพาะเจาะจงกับ TNF-α และ IL-6 เติม 50 มคล. package for social sciences (SPSS) program,
antibody cocktail ลงในแต่ละหลุม incubate version 18 เปรียบเทียบความแตกต่างของข้อมูลก่อน
well plate เป็นเวลา 1 ชม. บน plate shaker เขย่า และหลังรับประทานยาธรณีสัณฑะฆาตด้วย paired
ที่ 400 rpm จากนั้นล้างแต่ละหลุมด้วย wash buffer sample t-test ระดับนัยส�าคัญที่ p < 0.05
350 มคล. ก�าจัดของเหลวส่วนเกินให้หมด เติม 100
