Page 211 - วารสารการแพทย์แผนไทยและการแพทย์ ทางเลือก ปีที่ 19 ฉบับที่ 2 พฤษภาคม-สิงหาคม 2564

J Thai Trad Alt Med Vol. 19 No. 2 May-Aug 2021 441

ฉีด HPLC นำาไปวิเคราะห์ปริมาณสารไรนาแคนทิน ขุ่นเมื่อวัดค่าการดูดกลืนแสงที่ 530 นาโนเมตรเท่ากับ
ซี ในตำารับสารสกัดรากทองพันชั่งด้วยวิธี RP-HPLC 1 McFarland standard ซึ่งจะมีความหนาแน่นของ

6
ใช้วัฏภาคคงที่ (stationary phase) เป็นคอลัมน์ เชื้อ 1-5 x 10 เซลล์ต่อมิลลิลิตร ใช้สารละลายเชื้อรา
VertiSep UPS C HPLC column ขนาดเส้นผ่าน ที่เตรียมได้สำาหรับศึกษาฤทธิ์ในการต้านเชื้อรากลุ่ม
18
ศูนย์กลาง 4.6 มม. x ความยาว 250 มม. ขนาดอนุภาค เดอร์มาโตไฟต์ของเจลสารสกัดรากทองพันชั่งใน

5 ไมครอน และใช้วัฏภาคเคลื่อนที่ (mobile phase) ระดับหลอดทดลอง
ประกอบด้วย 0.1% กรดไตรฟลูออโรแอซิติกใน 2.5.2 การทดสอบฤทธิ์ 3 วิธี ดังนี้
แอซิโตไนไตรล์ (สารละลาย ก) และ 0.1% กรดไตร 1) การทดสอบฤทธิ์ต้านเชื้อราด้วยวิธี agar
้
ฟลูออโรแอซิติกในนำา (สารละลาย ข) ในอัตราส่วน well diffusion [17-18]
72:28 อัตราการไหลของวัฏภาคเคลื่อนที่ 1 มิลลิลิตร การทดสอบใช้อาหารแข็งชนิด Sabou-
ต่อนาที เป็นเวลา 20 นาที ตรวจวัดการดูดกลืนแสง raud dextrose agar ใน plastic petri dishes (90

อัลตราไวโอเลตที่ความยาวคลื่น 254 นาโนเมตร ใช้ mm DIA) นำามาเจาะรูลงบนอาหารแข็งตรงกลางจาน
ตัวอย่างของตำารับเจลสารสกัดรากทองพันชั่งที่เตรียม 1 หลุม โดยใช้ sterile cork borer ที่มีขนาดเส้นผ่าน

ได้ตามวิธีข้างต้นปริมาตร 50 ไมโครลิตรสำาหรับการ ศูนย์กลาง 8 มิลลิเมตร จากนั้นทำาการ spread เชื้อรา
วิเคราะห์ และใช้พื้นที่ใต้พีคคำานวณปริมาณสารไรนา สำาหรับทดสอบลงบนจานอาหารเพาะเลี้ยงด้วย sterile
แคนทิน ซี จากสมการเส้นตรงของกราฟสารมาตรฐาน cotton swab แล้วใส่เจลสารสกัดรากทองพันชั่งหรือ

ไรนาแคนทิน ซี ที่มีความเข้มข้น 10, 40, 70, 100, 130 เจลพื้นปริมาตร 100 ไมโครลิตรลงในหลุม นำาจาน
และ 160 ไมโครกรัมต่อมิลลิลิตร เพาะเชื้อไปเพาะเลี้ยงที่อุณหภูมิ 35 องศาเซลเซียส

2.5 การทดสอบฤทธิ์ต้านเชื้อราของเจลสารสกัด เป็นระยะเวลา 3-5 วัน และอ่านผลการทดสอบโดย
รากทองพันชั่งในระดับหลอดทดลอง วัดขนาดเส้นผ่านศูนย์กลางบริเวณใส (clear zone)
2.5.1 เชื้อจุลชีพ ที่เกิดขึ้นด้วย vernier caliper

เชื้อราสำาหรับใช้ทดสอบฤทธิ์ได้รับจาก 2) การทดสอบฤทธิ์ต้านเชื้อราโดยใช้เทคนิค
สถาบันวิจัยวิทยาศาสตร์สาธารณสุข กรมวิทยาศาสตร์ soft-agar overlay
การแพทย์ ประกอบด้วย Trichophyton rubrum การทดสอบใช้วิธีการที่ดัดแปลงจาก

[19]
DMST 30236, Trichophyton mentagrophytes Hockett KL และ Baltrus DA โดยใช้อาหารแข็ง
DMST 19735, Microsporum gypseum DMST ชนิด Sabouraud dextrose agar ใน plastic petri
21146, และ Microsporum canis 13-60-04317 dishes (90 mm DIA) เป็น bottom agar และเตรียม

โดยทำาการเพาะเลี้ยงบน Sabouraud dextrose agar Sabouraud dextrose agar ที่มีส่วนประกอบของ
slants และเก็บรักษาที่อุณหภูมิ 2-8 องศาเซลเซียสโดย agar ปริมาณ 1.5% นำาไปนึ่งฆ่าเชื้อที่อุณหภูมิ 121

เปลี่ยนอาหารใหม่อย่างน้อยทุก 2 สัปดาห์ การเตรียม องศาเซลเซียส เป็นเวลา 20 นาที ในขณะที่อาหารยัง
เชื้อสำาหรับการทดสอบทำาโดยเจือจางเชื้อแต่ละชนิด เหลว (soft agar) ใช้ sterile serological pipet ดูด
ใน 0.85% sodium chloride (NaCl) เพื่อให้มีความ อาหารปริมาตร 15 มิลลิลิตรใส่ลงใน sterile culture