Page 81 - วารสารกรมการแพทย์แผนไทยฯ ปีที่ 17 ฉบับที่ 3

J Thai Trad Alt Med Vol. 17 No. 3 Sep-Dec 2019 431

3.2 วิเคราะห์ด้วยวิธี ABTS radical เครื่อง microplate reader ที่ความยาวคลื่น 700 nm
scavenging assay และคำานวณหาปริมาณสารประกอบฟีนอลิกรวม โดย

+
เตรียมสารละลาย ABTS โดยเตรียม 7 mM เทียบจากกราฟมาตรฐาน gallic acid รายงานเป็น
ABTS ผสมกับ 2.45 mM potassium persulfate mgGAE/g extract [17]
ในอัตราส่วน 1:1 แล้วเก็บในที่มืดให้เกิดปฏิกิริยาเป็น

เวลา 16 ชั่วโมง จากนั้นเจือจางให้มีค่าการดูดกลืนแสง 5. ก�รวิเคร�ะห์ห�ปริม�ณฟล�โวนอยด์รวม
ที่ 0.8-0.9 ก่อนทำาการทดสอบ เตรียมสารสกัดตัวอย่าง วิเคราะห์หาปริมาณฟลาโวนอยด์รวมของสาร
+
ความเข้มข้นต่าง ๆ ผสมกับสารละลาย ABTS ใน สกัดโดยใช้วิธี aluminium chloride colorimetric
อัตราส่วนที่เท่ากัน ตั้งไว้ในที่มืดนาน 6 นาที และนำา assay เตรียมสารสกัดใบหม่อน ในความเข้มข้น
ไปวัดค่าการดูดกลืนแสงที่ความยาวคลื่น 700 นาโน ต่าง ๆ ผสมกับสารละลาย 2% aluminium chloride
เมตร ด้วยเครื่อง microplate reader โดยใช้โทรลอกซ์ ในอัตราส่วนที่เท่ากัน นำาไปวัดค่าการดูดกลืนแสงที่

เป็นสารมาตรฐาน และคำานวณค่า IC 50 [15] ความยาวคลื่น 415 นาโนเมตร ด้วยเครื่อง micro-
3.3 วิเคราะห์ด้วยวิธี Ferric ion Reducing plate reader โดยเทียบจากกราฟมาตรฐาน querce-

Antioxidant Power (FRAP) tin รายงานเป็น mgQE/g extract [18]
เตรียมสารละลาย FRAP และสร้างกราฟสาร
มาตรฐาน ferrous sulfate (FeSO .7H O) ที่ความ 6. ก�รวิเคร�ะห์ปริม�ณเมล�โทนิน
4 2
เข้มข้นในช่วง 0.001-0.2 mM ทดสอบโดยผสมสาร ในการวิเคราะห์ปริมาณเมลาโทนินด้วยเครื่อง
สกัดตัวอย่าง กับสารละลาย FRAP ในอัตราส่วน 2:8 Liquid Chromatography–Mass Spectrom-

ตั้งในที่มืดนาน 4 นาที จากนั้นวัดค่าการดูดกลืนแสง etry (LCMS 8030, Shimadzu Corp, Kyoto,
ที่ 595 nm โดยเปรียบเทียบกับสารมาตรฐานโทรลอกซ์ Japan) ใช้คอลัมน์ C-18 (Insertsil ODS-3 C18;
รายงานค่าเป็น FeSO mmol/100 g extract จากการ GL Sciences Inc., Japan) ขนาดเส้นผ่านศูนย์กลาง
4
คำานวณด้วยสูตร [(ความเข้มข้น ferrous sulfate × ภายใน 2.1 mm ความยาว 150 mm ขนาดอนุภาค
ปริมาตรทั้งหมด (ml) × 100)/(ปริมาตรของตัวอย่าง 3 ไมโครเมตร โดยมี injection volume เท่ากับ 2
(ml) × ความเข้มข้นของตัวอย่าง (g/ml))]/1,000 [16] ไมโครลิตร เฟสเคลื่อนที่ที่ใช้ คือ 0.45% formic acid

: acetonitrile (1:1) กำาหนดอัตราการไหลของเฟส
4. ก�รวิเคร�ะห์ห�ปริม�ณส�รประกอบฟีนอลิกรวม เคลื่อนที่เท่ากับ 0.2 มล./นาที ทำาให้เกิดไอออนโดย

วิเคราะห์หาปริมาณฟีนอลิกรวมของสาร ใช้เทคนิค Electrospray ionization (ESI) ตรวจ

สกัดโดยใช้วิธี folin ciocalteu colorimetric วัดมวลด้วย triple quadrupoles mass spec-
method เตรียมสารสกัดความเข้มข้นต่าง ๆ ผสม trometer with positive mode วิเคราะห์มวลโดย

กับ 10% folin-ciocalteu’s reagent และสารละลาย วิธี Multiple Reaction Monitoring (MRM) โดย
7% sodium carbonate ในอัตราส่วน 2:10:8 ทิ้งไว้ ดูการเปลี่ยนแปลง m/z จาก 233 เป็น 174 เทียบกับ
ในที่มืด 30 นาที จากนั้นวัดค่าการดูดกลืนแสงโดยใช้ สารมาตรฐานเมลาโทนิน [19]