Page 240 - Acrobat J Trad-21-3-2566

J Thai Trad Alt Med Vol. 21 No. 3 Sep-Dec 2023 723

A0-As centifuge tube แล้วเติม phosphate buffered
% inhibition of DPPH radical = × 100
A0 saline ปริมำณ 160 µl มำสกัดสำร เติมสำรละลำย
โดย A0 = ค่ำกำรดูดกลืนแสงตั้งต้น B คือ สำรละลำยสำรสกัดต�ำรับยำทัพยำธิคุณ ที่น�ำ

As = ค่ำกำรดูดกลืนแสงหลังจำกเติม มำเจือจำงให้ได้ควำมเข้มข้น ดังนี้ คือ 1 mg/ml, 0.5
สำร DPPH mg/ml, 0.313 mg/ml, 0.156 mg/ml, 0.078 mg/
น�ำค่ำ inhibition of DPPH radical มำสร้ำง ml, 0.039 mg/ml, 0.020 mg/ml, 0.098 mg/ml ดูด

กรำฟเพื่อหำค่ำ IC 50 ของสำรสกัดต�ำรับยำทัพยำธิคุณ สำรละลำย B ปริมำณ 160 µl มำสกัดกับสำรในข้อที่ 2
และสำรมำตรฐำน DPPH จำกนั้นน�ำไปเก็บในที่มืด เป็นเวลำ 3 ชั่วโมง เมื่อครบ

3 ชั่วโมง เติมสำรละลำย sulfanilamide ปริมำณ 20
3. ขั้นตอนในกำรทดสอบฤทธิ์ต้ำนกำรอักเสบ µl มำเก็บในที่มืด เป็นเวลำ 15 นำที แทนด้วย = C คือ

nitric oxide
สำร sulfanilamide 1% ละลำยกับ 5% phosphoric
การเตรียมสารละลาย acidเมื่อครบ 15 นำที เติมสำรละลำย naphthylene
A = sodium nitroprusside ปริมำณ 0.26 g diamine ปริมำณ 20 µl มำเก็บในที่มืด เป็นเวลำ 15

ในบีกเกอร์ (beaker) แล้วเติม water ปริมำณ 10 ml นำที แทนด้วย = D คือ สำร naphthylene diamine
มำสกัดสำร 0.1% ละลำยกับน�้ำ ปริมำณ 100 ml เมื่อครบ 15 นำที
B = ชั่งสำรสกัดต�ำรับยำทัพยำธิคุณ 10 mg เติมสำรละลำย A + B + C + D ใส่ลงใน 96 well

ใส่ในหลอด microcentifuge tube จำกนั้นดูดสำร plate 3 ควำมเข้มข้น ควำมเข้มข้นละ 100 µl เติม
ethanol 95% มำ 1,000 µl ท�ำกำรเขย่ำสำรละลำย สำรละลำย B ใส่ลงใน 96 well plate ควำมเข้มข้น
ให้เข้ำกัน น�ำมำเจือจำงให้ได้ควำมเข้มข้น ดังนี้ คือ 1 ละ 3 หลุม หลุมละ 100 µl น�ำสำรละลำย A + C +

mg/ml, 0.5 mg/ml, 0.313 mg/ml, 0.156 mg/ml, D ใส่ลงใน 96 well plate 3 หลุม หลุมละ 100 µl น�ำ
0.078 mg/ml, 0.039 mg/ml, 0.020 mg/ml, 0.098 มำวัดค่ำกำรดูดกลืนแสง ด้วยเครื่อง UV-VIS spec-
mg/ml trophotometer ที่ควำมยำวคลื่น 515 nm ดัดแปลง

C = ชั่ง sulfanilamide 1% ละลำยกับ 5% จำกวิธีกำรของ Phonphat Nitiwuttidecha โดย
[6]
phosphoric acid ใช้ ascorbic acid เป็นสำรมำตรฐำน

D = ชั่ง naphthylene diamine 0.1% ละลำย ค�ำนวณ % inhibition of nitric oxide ที่แต่ละ
กับน�้ำ ปริมำณ 100 ml ควำมเข้มข้นของสำรสกัดต�ำรับยำทัพยำธิคุณ และสำร
มำตรฐำน nitric oxide ด้วยสมกำรดังนี้
4. ขั้นตอนกำรทดลอง

% inhibition of nitric oxide = × 100
A control – A sample
ชั่ง sodium nitroprusside ปริมำณ 0.26 g A control
ในบีกเกอร์ (beaker) ละลำยกับน�้ำ ปริมำณ 10 ml A control = ค่ำกำรดูดกลืนแสงตัวควบคุม
แทนด้วย = A คือ สำร sodium nitroprusside A sample = ค่ำกำรดูดกลืนแสงของตัวอย่ำง
เติมสำรละลำย A ปริมำณ 680 µl ใน micro- ข้อมูลแสดงผลเป็นค่ำร้อยละ