Page 239 - Acrobat J Trad-21-3-2566

722 วารสารการแพทย์แผนไทยและการแพทย์ ทางเลือก ปีที่ 21 ฉบับที่ 3 กันยายน-ธันวาคม 2566

อิสระด้วยวิธีกำร DPPH (2,2-diphenyl-1-picryl- 2. ขั้นตอนในกำรทดสอบฤทธิ์ต้ำนอนุมูลอิสระ
hydrazyl radical) เพื่อหำค่ำควำมต้ำนอนุมูลอิสระ ด้วยวิธี DPPH radical scavenging assay

และสำรต้ำนอนุมูลอิสระ ทดสอบฤทธิ์ต้ำนกำรอักเสบ เตรียมสำรละลำย DPPH โดยชั่งสำร DPPH
โดยใช้กระบวนกำร nitric oxide เพื่อหำค่ำกำรยับยั้ง 15.78 mg ต้องกำรใช้สำร DPPH 0.2 mM ซึ่งต้อง
nitric oxide และศึกษำควำมคงตัว ด้วยวิธีทดสอบ เปลี่ยน mM เป็น mg โดย

โดยเก็บตัวยำไว้ในอุณหภูมิ 50, 60, 70, 80˚ซ. ระยะ 1 mole = 394.32 mg
เวลำ 3, 6, 9, และ 12 วัน โดยทดสอบด้วยสำรออก 0.2 mole = 0.2 × 394.32 = 78.86 mg

ฤทธิ์ piperine ในต�ำรับยำทัพยำธิคุณ เนื่องจำกเป็น 1,000 ml ใช้ DPPH 78.86 mg
สมุนไพรที่ใช้ปริมำณมำกที่สุดในต�ำรับและจัดเป็นตัว 200 ml ใช้ DPPH (78.86 × 200)/1,000 = 15.78 mg
ยำหลักในกำรออกฤทธิ์ทำงเภสัชกรรมไทย ลงในหลอด microcentifuge tube ดูดสำร ethanol

กำรศึกษำนี้ได้รับกำรพิจำรณำรับรองจริยธรรม 95% มำ 1000 ml ใส่หลอด microcentifuge tube
กำรวิจัยในมนุษย์ จำกวิทยำลัยกำรสำธำรณสุขสิรินธร ที่มีสำร DPPH ท�ำกำรเขย่ำให้สำรละลำยเข้ำกัน จำก
จังหวัดพิษณุโลก เอกสำรรับรองเลขที่ SCPHPL นั้นหยดสำรละลำย DPPH ลงใน volumetric flask

2/2566.1.14 เติมสำร ethanol 95% ปริมำณ 200 ml เขย่ำสำรให้
เข้ำกัน น�ำฟอยล์มำหุ้มเพื่อกันแสง น�ำเก็บใส่ตู้เย็น
1. ขั้นตอนกำรสกัดสำร ชั่งสำรสกัดต�ำรับยำทัพยำธิคุณ 10 mg ใส่หลอด

น�ำต�ำรับยำทัพยำธิคุณที่ได้จำกโรงพยำบำล microcentifuge tube จำกนั้นดูดสำร ethanol
สมเด็จพระยุพรำชเด่นชัย จังหวัดแพร่ ในรูปแบบยำ 95% มำ 1,000 µl ท�ำกำรเขย่ำสำรละลำยให้เข้ำกัน

ผง ปริมำณ 250 g แล้วน�ำมำชั่งน�้ำหนัก ด้วยเครื่อง น�ำสำรละลำยสำรสกัดต�ำรับยำทัพยำธิคุณมำเจือจำง
ชั่งสำร (digital scale) ให้ได้ปริมำณ 100 g น�ำใส่บีก ให้ได้ควำมเข้มข้น ดังนี้ คือ 5 mg/ml, 2.5 mg/ml,
เกกอร์ (beaker) ตวง ethanol 95% ปริมำณ 1,000 1.25 mg/ml, 0.625 mg/ml, 0.312 mg/ml, 0.156

ml น�ำมำสกัดกับต�ำรับยำทัพยำธิคุณ ในบีกเกอร์ mg/ml, 0.078 mg/ml, 0.039 mg/ml, 0.019 mg/
(beaker) จำกนั้นน�ำฟอยล์มำหุ้มเพื่อกันแสง เก็บ ml, 0.009 mg/ml น�ำสำรละลำยสำรสกัดต�ำรับยำทัพ

ในที่มืด เป็นเวลำ 3 วัน ที่อุณหภูมิห้อง โดยคนสำรทุก ยำธิคุณ ลงใน 96 well plate จ�ำนวน 3 ควำมเข้มข้น
วันเมื่อครบ 3 วัน น�ำสำรสกัดในบีกเกอร์ (beaker) ควำมเข้มข้นละ 3 หลุม และหยด DPPH ลงไป เก็บ
มำกรองด้วยเครื่องปั๊มสูญญำกำศ (vacuum pump ในที่มืดอุณหภูมิห้องเป็นเวลำ 30 นำที แล้วน�ำมำวัด

oil free) น�ำสำรสกัดที่ได้มำกลั่นระเหย ด้วยกำรกลั่น ค่ำกำรดูดกลืนแสงด้วยเครื่อง UV-VIS spectropho-
ระเหยสำรแบบหมุน rotary evaporator จนได้สำร tometer ที่ควำมยำวคลื่น 515 nm ดัดแปลงวิธีกำร
[5]
สกัดเป็นน�้ำเหลว จำกนั้นน�ำมำระเหยต่อใน water ของพิชชำภรณ์ วันโย โดยใช้ ascorbic acid เป็นสำร
bath ที่อุณหภูมิ 50˚ซ. สำรสกัดที่ได้มีลักษณะเป็น มำตรฐำนค�ำนวณ % inhibition of DPPH radical
ของเหนียวมีสีน�้ำตำลเข้ม เก็บสำรสกัดไว้ในตู้เย็น ที่ แต่ละควำมเข้มข้นของสำรสกัดต�ำรับยำทัพยำธิคุณ
อุณหภูมิ 2-4˚ซ. และสำรมำตรฐำน DPPH ด้วยสมกำรดังนี้