Page 233 - วารสารการแพทย์แผนไทยและการแพทย์ ทางเลือก ปีที่ 19 ฉบับที่ 2 พฤษภาคม-สิงหาคม 2564
P. 233
J Thai Trad Alt Med Vol. 19 No. 2 May-Aug 2021 463
ดังนี้ reaction mixture ประกอบด้วย nitroblue 2.4. การศึกษาฤทธิ์ลดไขมันในสัตว์ทดลอง
tetrazolium 258 ไมโครโมลาร์, nicotinamide การศึกษานี้ใช้หนูแรท สายพันธุ์ Spraque
adenine dinucleotide (NADH) 996 ไมโครโมลาร์ Dawley เพศผู้ นำ้าหนักตัว 160-180 กรัม อายุประมาณ
และ phenazine methosulfate (PMS) 16.2 ไมโคร- 6 สัปดาห์ จำานวน 63 ตัว ซื้อจากบริษัทโนมูระ สยาม
โมลาร์ และสารสกัดหรือสารมาตรฐาน gallic acid ที่ อินเตอร์เนชั่นแนล จำากัด นำามาเลี้ยงไว้ในห้องเลี้ยง
ความเข้มข้น 1-100 ไมโครกรัม/มิลลิลิตร โดยเตรียม สัตว์ทดลองของศูนย์สัตว์ทดลอง สถาบันวิจัย
สารทุกตัวใน phosphate buffer ทิ้งไว้ที่อุณหภูมิห้อง วิทยาศาสตร์สาธารณสุข กรมวิทยาศาสตร์การแพทย์
เป็นเวลา 5 นาที วัดค่าการดูดกลืนแสงด้วย micro- โดยเลี้ยงในชุดกรงเลี้ยงสัตว์ทดลองแบบปลอดเชื้อ
plate reader ที่ 562 นาโนเมตร ผลที่ได้แสดงเป็น (individually ventilated cage, IVC) อย่างน้อย 1
ค่าร้อยละของ activity เทียบกับกลุ่มที่เกิดปฏิกิริยา สัปดาห์ ก่อนทำาการทดลองเพื่อให้สัตว์ทดลองคุ้นเคย
100% คำานวณฤทธิ์ต้านอนุมูลซุปเปอร์ออกไซด์เป็น และปรับตัวให้เข้ากับสภาพแวดล้อมและสถานที่ ซึ่งมี
ร้อยละของการยับยั้ง แล้วนำามา plot กราฟเพื่อหา อุณหภูมิ 23 ± 3 องศาเซลเซียส ความชื้นสัมพัทธ์ 60
ค่า IC เปรียบเทียบความเข้มข้นของสารทดสอบกับ ± 20% ควบคุมความมืด/ความสว่างสลับกัน 12
50
ความเข้มข้นของสารมาตรฐาน ชั่วโมง ระหว่างนั้นให้สัตว์ทดลองกินอาหารสำาเร็จรูป
2.3. การศึกษาฤทธิ์ยับยั้งเอนไซม์ HMG-CoA ของบริษัทเพอร์เฟค คอมพาเนียนกรุ๊ป จำากัด และดื่ม
reductase นำ้าตามปกติ
ตรวจสอบฤทธิ์ยับยั้งการทำางานของเอนไซม์ การเตรียมอาหารไขมันสูง อาหารสัตว์ทดลองที่
HMG-CoA reductase ด้วยวิธี colorimetric โดยใช้ มีไขมันสูงประกอบด้วยคอเลสเตอรอล 0.250% +
ชุดทดสอบ HMG-CoA reductase assay kit (Sig- โคลิกแอซิด 0.125% + ซูโครส 40% + นำ้ามันถั่วลิสง
ma) ซึ่งมี HMG-CoA เป็นสารตั้งต้น และประเมิน 10% + อาหารสัตว์ทดลองปกติ 49.625%
การลดลงของ NADPH โดยวัดการดูดกลืนแสงด้วย เตรียมส่วนผสมโดยบดอาหารสัตว์ทดลองและ
microplate reader ที่ความยาวคลื่น 340 นาโนเมตร โคลิกแอซิดให้เป็นผงละเอียด และละลายซูโครสด้วย
ที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียส ซึ่งวัดเป็น kinetic ทุก นำ้ากลั่นเป็นสารละลายซูโครส เตรียมอาหารไขมันสูง
1 นาที เป็นเวลา 15 นาที และใช้พราวาสแตติน โดยผสมอาหารสัตว์ทดลอง คอเลสเตอรอล และ
(pravastatin) เป็นสารควบคุมบวก ความเข้มข้นของ โคลิกแอซิดให้เข้ากัน นำาส่วนผสมแห้งนี้ไปนวดให้เป็น
สารสกัดที่ทดสอบ คือ 25-100 ไมโครกรัม/มิลลิลิตร เนื้อเดียวกันโดยใช้เครื่องผสมอาหาร หลังจากนวด
ผลที่ได้แสดงเป็นค่าเป็นการทำางานของเอนไซม์ ส่วนผสมแห้งเป็นเวลา 10-15 นาที ค่อย ๆ เติม
(Units/mg protein) และแปลงค่าการทำางานของ สารละลายซูโครสและนำ้ามันปริมาณน้อยโดยเติมสลับ
เอนไซม์ให้เป็นร้อยละของการยับยั้ง โดยเทียบกับ กัน แล้วนวดนาน 5 นาที ก่อนจะเติมครั้งต่อไป ทำา
กลุ่มที่เกิดปฏิกิริยาโดยสมบูรณ์ซึ่งมีค่าร้อยละของการ อย่างนี้จนแล้วเสร็จ หลังจากนั้นนำาส่วนผสมที่เป็นเนื้อ
ยับยั้งเป็นศูนย์ และหาค่า IC 50 เดียวกันแล้วไปเข้าเครื่องรีดอาหาร ตัดอาหารให้เป็น
