Page 197 - วารสารการแพทย์แผนไทยและการแพทย์ ทางเลือก ปีที่ 19 ฉบับที่ 2 พฤษภาคม-สิงหาคม 2564

J Thai Trad Alt Med Vol. 19 No. 2 May-Aug 2021 427

บริสุทธิ์ 95% สำาหรับการศึกษาเปรียบเทียบคุณสมบัติ 2. วิธีก�รศึกษ�
ของพิโนสโตรบินที่แยกจากกระชาย 2.1 การแยกสารพิโนสโตรบินจากกระชาย

1.3 ตัวทำาละลายอินทรีย์และสารเคมี ก. การสกัดสาร โดยวิธีการแช่สกัด (mace-
Dichloromethane AR (RCI Labscan ration) นำาผงกระชาย นำ้าหนัก 1 กิโลกรัม บรรจุลงใน
Limited, Thailand), methanol AR (Merck, ภาชนะที่มีฝาปิดสนิท เติมเอทานอล 95% ให้ท่วมผง

Germany), methanol HPLC (Merck, Germany), กระชาย แช่สกัดนาน 3 วัน โดยคนส่วนผสมเป็น
acetonitrile HPLC (Merck, Germany), ethanol ระยะ ๆ กรองสารสกัดที่ได้ แล้วเติมเอทานอล 95%
95%, diphenylboric acid b-ethylamino ester ลงในภาชนะเดิมเพื่อแช่สกัดซำ้า โดยการสกัดซำ้า 2

(Sigma-Aldrich, Germany), polyethylene glycol ครั้ง ๆ ละ 3 วัน กรอง รวบรวมสารสกัดที่ได้ไประเหย
4000 (Ajax Chemicals, Australia) ด้วย เครื่องระเหยภายใต้สุญญากาศจนได้สารสกัด
1.4 วัสดุวิทยาศาสตร์ เข้มข้นมีลักษณะหนืดสีนำ้าตาลแดง จากนั้นตั้งไว้จะ

Sephadex LH20 (Sigma, Switzerland), เกิดตะกอนสีเหลืองในสารสกัดข้นหนืดนั้น
TLC plate Silica gel 60 ความหนา 0.25 มิลลิเมตร ข. การแยกสาร โดยวิธีเจลฟิลเตรชั่น

TM
(Merck, Germany), Acquity BEH C18 column โครมาโทกราฟี (gel filtration chromatography)
1.7 ไมโครเมตร, 2.1 × 50 มิลลิลิตร (Waters, USA), นำาตะกอนสีเหลืองที่ได้มาละลายด้วยเมทานอล แล้ว
glass column, chromatographic chamber, กรองผ่าน Sephadex LH20 ที่บรรจุอยู่ในคอลัมน์

Buchner funnel และเครื่องแก้ววิทยาศาสตร์ แก้ว ทำาการชะด้วยเมทานอล และรองรับของเหลวที่
1.5 เครื่องมือ ชะออกมาจากคอลัมน์โดยเก็บแฟรคชั่น (fraction) ละ

เครื่องบดสมุนไพร, ตู้อบร้อน (Mammert, 50 มิลลิลิตร ระเหยแต่ละแฟรคชั่นด้วยเครื่องระเหย
Germany), เครื่องชั่งไฟฟ้า ความละเอียด 0.1-0.01 สุญญากาศเพื่อลดปริมาตรลงเหลือหนึ่งในสี่ส่วน ตั้ง
มิลลิกรัม (Mettler-Toledo, Switzerland), เครื่อง สารละลายสารสกัดเข้มข้นไว้จะเกิดผงสีเหลืองอ่อน

ชั่งไฟฟ้า ความละเอียด 0.01 กรัม (Sartorius, ตกออกมา รวมแฟรคชั่นที่มีผงสีเหลืองอ่อนเข้าด้วย
Germany), ชุดเครื่องระเหยสุญญากาศ (Eyela, กัน กรองเก็บรวบรวมผงสีเหลือง
USA), High Performance Liquid Chromato- ค. การทำาสารที่แยกได้ให้บริสุทธิ์ โดยวิธี
้
graph-Quadrupole-Time of Flight (HPLC- ตกผลึกซำา (recrystallization) นำาผงสีเหลืองอ่อนมา
QTOF) (Agilent Technology, USA), Ultra Per- ละลายในเมทานอล กรองสารละลายที่ได้ผ่านกระดาษ
formance Liquid Chromatograph-Photo Diode กรองบน Buchner funnel โดยใช้ปั๊มสุญญากาศช่วย

Array (UPLC-PDA) (Waters, USA), ตู้ดูดความชื้น, ในการกรอง จากนั้นนำาสารละลายที่ได้มาตั้งทิ้งไว้จะได้
TLC plate heater (CAMAG, Switzerland), ผงสีขาวนวล (หากยังไม่ได้ผงที่มีลักษณะสีขาวนวลให้
้
้
เครื่องถ่ายภาพ TLC (TLC scanner) (CAMAG, ทำาขั้นตอนนี้ซำา) นำาไปชั่งนำาหนักเพื่อหาปริมาณสารที่
Switzerland), ชุดสกัดสารประกอบด้วย เตาบุนวม แยกได้ เก็บสารที่แยกได้ไว้ในโถดูดความชื้น
้
ไฟฟ้า ส่วนควบแน่น และเครื่องทำานำาเย็นหมุนเวียน