Page 90 - วารสารกรมการแพทย์แผนไทยฯ ปีที่ 17 ฉบับที่ 3

440 วารสารการแพทย์แผนไทยและการแพทย์ ทางเลือก ปีที่ 17 ฉบับที่ 3 กันยายน-ธันวาคม 2562

2557 ซึ่งตัวอย่างยางนา (No. PSKKF03682) ถูก red ความเข้มข้น 50 µg/ml แล้วบ่มอีก 2 ชั่วโมง เมื่อ
นำามาตรวจสอบลักษณะทางพฤกษศาสตร์โดย รศ. ครบเวลา 2 ชั่วโมง ล้างเซลล์และเติม 0.33% HCl ใน

ศุภชัย ติยวรนันท์ สาขาวิชาเภสัชเวทและพิษวิทยา isopropanol นำาไปวัดค่าการดูดกลืนแสงที่ 537 nm
คณะเภสัชศาสตร์ มหาวิทยาลัยขอนแก่น และเก็บ และความยาวคลื่นอ้างอิงที่ 650 nm และคำานวณเป็น
ตัวอย่างยางนาไว้ในห้องปฏิบัติการเภสัชเวทและ ค่า IC [18]
50
พิษวิทยา คณะเภสัชศาสตร์ มหาวิทยาลัยขอนแก่น
และในการเตรียมสารสกัดเริ่มโดยนำาส่วนต่าง ๆ ของ 3. ก�รทดสอบฤทธิ์ต้�นเชื้อร�
ยางนามาทำาความสะอาด แล้วบดให้ละเอียด จากนั้น 3.1 การเพาะเลี้ยงเซลล์

นำาไปแช่สกัดด้วยเมทานอล เป็นเวลา 24 ชั่วโมง แล้ว การทดลองนี้แบ่งเชื้อทั้งหมด 2 กลุ่มคือเชื้อ
นำาสารละลายที่ได้ไปกรองและระเหยแห้งตัวทำาละลาย ราก่อโรคกลากได้แก่ Trichophyton mentag-
ด้วยเครื่องระเหยแบบสูญญากาศ แล้วนำาไปทำาให้เป็น rophytes ATCC9533, Trichophyton rubrum

ผงแห้งด้วยเครื่องทำาแห้งแบบแช่เยือกแข็ง ATCC MYA4438, Microsporum gypseum
ATCC MYA4604 และ Epidermophyton floc-
2. ก�รทดสอบฤทธิ์ต้�นมะเร็ง cosum ATCC15694 เพาะเลี้ยงเชื้อรา T. mentag-

2.1 การเพาะเลี้ยงเซลล์ rophytes ในอาหาร potato dextrose broth (PDB)
เซลล์ Human hepatocellular carcinoma บ่มที่อุณหภูมิ 28 C เป็นเวลา 7 วัน เพาะเลี้ยงเชื้อ
°
(HepG2) เซลล์ cervical adenocarcinoma (HeLa) รา T. rubrum, M. gypseum และ E. floccosum
และ เซลล์ African green monkey kidney (Vero) ในอาหาร Sabourad dextrose broth (SDB) บ่มที่

จะถูกเพาะเลี้ยงในอาหาร DMEM ที่มีการเติม 10% อุณหภูมิ 28 C เป็นเวลา 5 วัน และกลุ่มเชื้อราก่อ
°
fetal bovine serum (FBS) และเซลล์ human รังแค ได้แก่ Malassezia furfur ATCC14521 เพาะ
acute T cells leukemia cells line (Jurkat) จะ เลี้ยงเชื้อราใน modified Dixon’s broth (MDB) บ่ม

ถูกเพาะเลี้ยงในอาหาร RPMI ที่มีการเติม 10% fetal ที่อุณหภูมิ 28 C เป็นเวลา 2 วัน
°
bovine serum (FBS) โดยทุกเซลล์จะถูกเพาะเลี้ยง 3.2 การทดสอบฤทธิ์ต้านเชื้อรา
ในตู้เพาะเลี้ยงเซลล์ด้วยอุณหภูมิ 37 C ที่มีก๊าซ การทดสอบฤทธิ์ต้านเชื้อราก่อโรคกลากด้วยวิธี
°
คาร์บอนไดออกไซด์ความเข้มข้น 5% broth macrodilution (โดยทดสอบในหลอดทดลอง
2.2 การทดสอบความเป็นพิษในเซลล์มะเร็ง ปริมาตรรวม 2 มิลลิลิตร/หลอดทดลอง) และทดสอบ
การศึกษาความเป็นพิษของเซลล์ใช้วิธี Neutral ฤทธิ์ต้านเชื้อราก่อรังแคด้วยวิธี broth microdilution

red uptake assay โดยนำาเซลล์มาเพาะเลี้ยงในถาด (โดยทดสอบในถาดหลุดชนิด 96 หลุม ปริมาตรรวม
หลุมชนิด 96 หลุม (96 well plate) เป็นเวลา 24 200 ไมโครลิตร/หลุม) เริ่มจากการเตรียมสารแขวน
้
ชั่วโมง แล้วเซลล์จะถูกทดสอบด้วยการเติมสารสกัด ตะกอนเชื้อราในนำาปราศจากเชื้อให้มีความขุ่นเท่ากับ
ความเข้มข้นต่าง ๆ คือ 10-500 µg/ml บ่มต่อเป็น McFarland No. 0.5 แล้วนำาสารแขวนตะกอนที่ได้
เวลา 24 ชั่วโมง จากนั้นล้างเซลล์และเติม neutral มาผสมกับอาหารเลี้ยงเชื้อราที่เหมาะสมให้มีปริมาณ