Page 91 - วารสารกรมการแพทย์แผนไทยฯ ปีที่ 17 ฉบับที่ 3

J Thai Trad Alt Med Vol. 17 No. 3 Sep-Dec 2019 441

ของเชื้อในอาหารเลี้ยงเชื้อ 5%v/v นำาไปผสมกับสาร ไหล 0.8 ml/min อุณหภูมิคอลัมน์ 40 C และฉีดสาร
°
สกัดยางนาที่ความเข้มข้นแตกต่างกัน 5 ความเข้มข้น ตัวอย่างปริมาตร 20 µl โดยใช้ UV-diode array de-

ในอัตราส่วนที่เท่ากัน แล้วนำาไปบ่มที่อุณหภูมิ 28 C tector ที่ความยาวคลื่น 280 nm (hydroxybenzoic
°
เป็นเวลา 7 วันสำาหรับการทดสอบฤทธิ์ต้านเชื้อรา acids) และ 320 nm (hydroxycinnamic acids) ซึ่ง
T. mentagrophytes และ บ่มเป็นเวลา 5 วันสำาหรับ HPLC chromatogram ของสารตัวอย่างจะถูกเปรียบ

การทดสอบฤทธิ์ต้านเชื้อรา T. rubrum, M. gypseum เทียบกับสารมาตรฐานฟีนอลิกที่เวลาเดียวกัน [20]
และ E. floccosum และเป็นเวลา 2 วันสำาหรับการ
ทดสอบฤทธิ์ต้านเชื้อรา M. furfur แล้วสังเกตการ 5. ก�รวิเคร�ะห์ข้อมูลท�งสถิติ
่
เจริญของเชื้อราด้วยตาเปล่า ความเข้มข้นที่ตำาที่สุดที่ ข้อมูลต่าง ๆ จะถูกแสดงในรูปแบบของ ค่า
ไม่มีการเจริญของเชื้อราจะเป็นค่า MIC และใช้อาหาร เฉลี่ย ± ค่าเบี่ยงเบนมาตรฐาน การวิเคราะห์ค่าเฉลี่ย
เลี้ยงเชื้อเป็นกลุ่มควบคุมเชิงลบ (negative control) จะใช้ one-way ANOVA และวิเคราะห์ความแตก

1% DMSO ในอาหารเลี้ยงเชื้อเป็นกลุ่มตัวทำาละลาย ต่างด้วยวิธี Tukey’s HSD (Honestly Significant
ควบคุม (solvent control) และใช้ clotrimazole Difference) ที่ระดับความเชื่อมั่น 95% (p < 0.05)

และ ketoconazole เป็นกลุ่มควบคุมเชิงบวก (posi- ด้วยโปรแกรม SPSS 19.0
tive control)
[19]
ผลก�รศึกษ�
4. ก�รวิเคร�ะห์ส�รประกอบฟีนอลิกด้วยเทคนิค
HPLC 1. ก�รเตรียมส�รสกัดย�งน�

การวิเคราะห์สารประกอบฟีนอลิกด้วย HPLC ในการเตรียมสารสกัดยางนาโดยนำาตัวอย่าง
(1100 Series, Agilent) ด้วย column ขนาด 5 µm ยางนาในแต่ละส่วนมาแช่สกัดด้วยเมทานอลเป็นเวลา
particle size, 250 x 4.6 mm (HiQsil, Tokyo, Ja- 24 ชั่วโมง พบว่าใบยางนาได้ปริมาณของสารสกัด

pan) โดยใช้ mobile phase ที่เป็นส่วนผสมระหว่าง สูงสุดโดยพบร้อยละของผลได้ 11.8 รองลงมาคือสาร
้
1% acetic acid (v/v) ในนำาปราศจากไอออน (sol- สกัดจากกิ่งและเปลือกตามลำาดับ (ตารางที่ 1)
vent A) และ acetonitrile (solvent B) ซึ่งใช้ระบบ

gradient program เริ่มจาก 0-5 นาที, 5% solvent B; ตารางที่ 1 ปริมาณสารสกัดของยางนาในส่วน
จาก 5-15 นาที, 9% solvent B; จาก 15-22 นาที, 11% ต่าง ๆ
solvent B; จาก 22-38 นาที, 18% solvent B; จาก ส่วน น�้าหนัก น�้าหนัก ร้อยละ

38-43 นาที, 23% solvent B; จาก 43-44 นาที, 90% ของ ตัวอย่างแห้ง สารสกัดที่ได้ ของผลผลิต
solvent B; จาก 44-45 นาที, 80% solvent B; จาก ยางนา (g) (g) (%)

45-55 นาที, isocratic ที่ 80% solvent B; จาก 55- ใบ 1,300 153.5 11.8
65 นาที, re-equilibration ที่ 5% solvent B; linear เปลือก 700 29.7 4.2
gradient จาก 65-70 นาที, 5% solvent B ที่อัตราการ กิ่ง 1,900 115.4 6.1