Page 57 - วารสารกรมการแพทย์แผนไทยฯ ปีที่ 18 ฉบับที่ 2

J Thai Trad Alt Med Vol. 18 No. 2 May-Aug 2020 279

เวลา 1 ชั่วโมง กรองและปรับปริมาตรด้วย methanol ตารางที่ 1 วัฏภาคเคลื่อนที่แบบ Gradient program
จนครบ 50 มิลลิลิตร time (min) flow (ml/min) water acetonitrile

การเตรียมสารละลายมาตรฐาน AS, MS, AA
initial 0.6 85 15
และ MA 1.5 0.6 40 60
การเตรียมสารละลายตัวอย่างสารสกัดบัวบก 2.0 0.6 0 100

ชั่งสารสกัดบัวบกน�้าหนัก 20 มิลลิกรัม ลงใน 3.0 0.6 0 100
volumetric flask ขนาด 50 มิลลิลิตร ละลายและปรับ 4.0 0.6 85 15
ปริมาตรจนครบ ด้วย methanol

การเตรียมสารละลายมาตรฐาน ต้องของวิธีวิเคราะห์ทางเคมีโดยห้องปฏิบัติการเดียว
[18]
ชั่งสารมาตรฐาน AS, MS, AA และ MA น�้า กรมวิทยาศาสตร์การแพทย์ กระทรวงสาธารณสุข
หนัก 30 มิลลิกรัม ละลายและปรับปริมาตรด้วย 2.1 ความเป็นเส้นตรง (linearity) และช่วง

methanol จนครบ 250 มิลลิลิตร จากนั้นเจือจางให้ การวิเคราะห์ (range)
ได้ 6 ระดับ โดยสารละลายของสารมาตรฐาน AS, AA การทดสอบความเป็นเส้นตรง (linearity)

และ MA เตรียมความเข้มข้นที่ 0.01-0.08 มิลลิกรัม/ และช่วงการวิเคราะห์ (range) โดยฉีดสารละลายสาร
มิลลิลิตร และ สารละลายสารมาตรฐาน MS เตรียม AS, MS, AA และ MA ที่ 6 ระดับความเข้มข้น ความ
ความเข้มข้นที่ 0.03-0.2 มิลลิกรัม/มิลลิลิตร เข้มข้นละ 3 ซ�้า และวิเคราะห์ 3 ครั้ง ด้วยเครื่อง UPLC

น�าค่า peak area และความเข้มข้นของสารละลาย สาร
สภ�วะของระบบโครม�โทกร�ฟี มาตรฐาน AS, MS, AA และ MA ไปสร้าง calibra-

วัฏภาคคงที่ Column: Acquity UPLC BEH tion curve ผลการศึกษาดังภาพที่ 5
®
C 1.7 mm, 2.1 x 50 mm จากภาพที่ 5 พบว่า calibration curve ของสาร
18
อุณหภูมิคอลัมน์ 40 องศาเซลเซียส มาตรฐาน AS (i), MS (ii), AA (iii.) และ MA (iv)

วัฏภาคเคลื่อนที่ Gradient Water: Acetoni- มีลักษณะเป็นเส้นตรง โดยสารมาตรฐาน AS, AA
trile และ MA มีลักษณะเป็นเส้นตรงในช่วงความเข้มข้น
อัตราการไหล 0.6 มิลลิลิตร/นาที 0.01-0.1 มิลลิกรัม/มิลลิลิตร และ สารมาตรฐาน MS

การตรวจวัดสาร PDA ที่ความยาวคลื่น 205 มีลักษณะเป็นเส้นตรงในช่วงความเข้มข้น 0.03-0.21
นาโนเมตร มิลลิกรัม/มิลลิลิตร โดยสารมาตรฐานทั้ง 4 ชนิด มี
ปริมาตรการฉีด 4 ไมโครลิตร ค่า coefficient (R ) เท่ากับ 0.999
2
2. การทดสอบความใช้ได้ของวิธีวิเคราะห์ทาง 2.2 ความแม่น (accuracy) และความเที่ยง
เคมี (precision)

การทดสอบความใช้ได้ของวิธีวิเคราะห์ปริมาณ การทดสอบความแม่น (accuracy) โดยเติม
สาร AS, MS, AA และ MA ในวัตถุดิบและสารสกัด สารมาตรฐาน (spike) ที่ความเข้มข้นระดับต่าง ๆ ใน
บัวบกที่พัฒนาขึ้นตามแนวปฏิบัติการทดสอบความถูก ช่วงการใช้งาน 3 ระดับ ลงใน sample blank แล้ว