Page 99 - วารสารปีที่15ฉบับที่3
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∑’Ëæ∫‰¥â∫àÕ¬„πªí®®ÿ∫—π º≈¢Õß°“√»÷°…“ “¡“√∂π” ‡´≈‡´’¬ ‡ªìπ‡«≈“ 16 - 18 ™—Ë«‚¡ß ·≈â«π”¡“‡®◊Õ
‰ªæ—≤𓇪ìπ¬“μâ“π‡™◊ÈÕ·∫§∑’‡√’¬‰¥â„πÕπ“§μμàÕ‰ª ®“ߥ⫬ “√≈–≈“¬ 0.85 % NaCl ‡∑’¬∫§«“¡¢ÿàπ°—∫
0.5 McFarland ‡æ◊ËÕ„À≥⮔π«π‡™◊ÈÕ·∫§∑’‡√’¬
√–‡∫’¬∫«‘∏’»÷°…“ ª√–¡“≥ 108 cfu/ml À≈—ß®“°π—Èπ ªÑ“¬‡™◊ÈÕ≈ß∫π
Õ“À“√‡≈’Ȭ߇™◊ÈÕ Mueller-Hinton Agar (MHA)
«— ¥ÿ·≈–«‘∏’°“√»÷°…“
«“ß·ºàπ°√–¥“…°√Õß What man No.1 ¢π“¥ 6
1. °“√‡μ√’¬¡μ—«Õ¬à“ß≈”μâπ™–‡Õ¡‡Àπ◊Õ ¡‘≈≈‘‡¡μ√ ∑’Ë¡’ “√≈Ÿªîπ‘øÕ≈‘π ®”π«π 25, 50, ·≈–
π”≈”μâπ¢Õß™–‡Õ¡‡Àπ◊Õ (Derris reticulata 75 μg/disc μ“¡≈”¥—∫ «‘∏’°“√‡μ√’¬¡ disc „Àâ¡’
Craib.) ®“°ªÉ“ ¡ÿπ‰æ√ ®—ßÀ«—¥ª√“®’π∫ÿ√’ μ—¥‡ªìπ ≈Ÿªîπ‘øÕ≈‘πª√‘¡“≥¥—ß°≈à“« ∑”‰¥â‚¥¬≈–≈“¬ “√
™‘Èπ‡≈Á° Ê ·≈â«π”‰ªÕ∫„π Hot air oven ∑’ËÕÿ≥À¿Ÿ¡‘ ≈Ÿªîπ‘øÕ≈‘π 2 mg/ml ¥â«¬ 0.1 N NaOH ·≈â«
50 Õß»“‡´≈‡´’¬ ≈”μâπ∑’ËÕ∫·≈⫇°Á∫‰«â„π∑’Ë·Àâß ªî‡ªμ≈ß∫π·ºàπ disc ∑—π∑’ª√‘¡“≥ 12.5, 25 ·≈–
‰¡à¡’§«“¡™◊Èπ ∑’ËÕÿ≥À¿Ÿ¡‘ÀâÕß ®π°«à“®–„™â𔉪„™â„π 37.5 μl μ“¡≈”¥—∫ „™â 0.1 N NaOH ·≈–¬“ªØ‘™’«π–
°“√∑¥≈Õß Ampicillin ‡ªìπ Vehicle control ·≈– Positive
2. °“√∑¥ Õ∫§«“¡∫√‘ ÿ∑∏‘Ï·≈–°“√æ‘ Ÿ®πå‡Õ°≈—°…≥å control μ“¡≈”¥—∫ π”®“π‡æ“–‡≈’Ȭ߇™◊ÈÕ‰ª∫à¡„πμŸâ
¢Õß “√≈Ÿªîπ‘øÕ≈‘π Õ∫‡æ“–‡≈’Ȭ߇™◊ÈÕÕÿ≥À¿Ÿ¡‘ 37 Õß»“‡´≈‡´’¬ ‡ªìπ‡«≈“
≈”μâπ™–‡Õ¡‡Àπ◊Õ∑’Ëμ—¥‡ªìπ™‘Èπ‡≈Á°®”π«π 60 24 ™—Ë«‚¡ß «—¥¢π“¥ inhibition zones √Õ∫·ºàπ
°√—¡ π”¡“ °—¥¥â«¬‡Œ°‡´π ‚¥¬„™â Soxhlet extrac- °√–¥“… °√Õß·≈â«∫—π∑÷°º≈ ∑”°“√∑¥≈Õß 3 §√—Èß
tor À≈—ß®“°π—Èππ” “√≈–≈“¬∑’ˉ¥âπ”¡“≈â“ߥ⫬πÈ” 2 3.2 «‘∏’ Minimum inhibition concen-
§√—Èß π” à«π∫π∑’ˇªìπ™—Èπ¢Õ߇Œ°‡´π·¬°ÕÕ°¡“ tration (MIC) ·≈– Minimum bactericidal con-
·≈â«∑”°“√·¬° “√„Àâ∫√‘ ÿ∑∏‘ϥ⫬«‘∏’ Crystallization centration (MBC)
À≈—ß®“°π—Èπ∑¥ Õ∫§«“¡∫√‘ ÿ∑∏‘Ï¢Õß “√‡∫◊ÈÕßμâπ¥â«¬ ∑”°“√∑¥ Õ∫¥â«¬«‘∏’ Microdilution
[9]
«‘∏’ Thin layer chromatography ∫π·ºàπ Silica method „πÀ≈ÿ¡‡æ“–‡≈’Ȭ߇™◊ÈÕ 96 well plate
gel G F2 Õ–≈Ÿ¡‘‡π’¬¡ ‚¥¬„™â Dichrolometh- ≈–≈“¬ “√≈Ÿªîπ‘øÕ≈‘π „π 0.1 N NaOH ·≈â«‡μ‘¡
60 54
[6]
ane: Methanol „πÕ—μ√“ à«π 95:5 ·≈–æ‘ Ÿ®πå ≈ß„πÀ≈ÿ¡‡æ“–‡™◊ÈÕ∑’Ë¡’Õ“À“√‡≈’Ȭ߇™◊ÈÕ MHB „Àâ¡’
‡Õ°≈—°…≥å¢Õß “√≈Ÿªîπ‘øÕ≈‘π‡À¡◊Õπ°—∫°“√»÷°…“ §«“¡‡¢â¡¢âπ¢Õß “√≈Ÿªîπ‘øÕ≈‘πμ—Èß·μà 0.25 - 512 μg/
[7]
¢Õß °¡≈ Õ¬Ÿà ÿ¢·≈–§≥– ml ¥â«¬«‘∏’ two-fold serial dilutions À≈—ß®“°π—Èπ
3. °“√∑¥ Õ∫ƒ∑∏‘Ïμâ“π·∫§∑’‡√’¬ ‡μ‘¡‡™◊ÈÕ Bacillus cereus „Àâ¡’®”π«π‡™◊ÈÕ ÿ¥∑⓬
5
3.1 «‘∏’ Disc diffusion „πÀ≈ÿ¡∑¥≈Õ߇∑à“°—∫ 5×10 cfu/ml °“√∑¥≈Õߥ⫬
·∫§∑’‡√’¬∑’Ë„™â„π°“√∑¥ Õ∫§◊Õ Bacillus «‘∏’π’È„™â¬“ªØ‘™’«π– Ampicillin, 0.1 N NaOH
cereus (TISTR 687) ‚¥¬‡æ“–‡≈’Ȭ߷∫§∑’‡√’¬„π ·≈–À≈ÿ¡∑’ˉ¡à„ à “√≈Ÿªîπ‘øÕ≈‘𠇪ìπ positive, ve-
Õ“À“√ Mueller-Hinton Broth (MHB) ∫ࡇ™◊ÈÕ„Àâ hicle control ·≈– negative control μ“¡≈”¥—∫
‡®√‘≠‡μ‘∫‚μ∑’ËμŸâÕ∫‡æ“–‡≈’Ȭ߇™◊ÈÕÕÿ≥À¿Ÿ¡‘ 37 Õß»“ π”À≈ÿ¡‡æ“–‡≈’Ȭ߇™◊ÈÕ 96 well plate ‰ª ∫à¡„πμŸâÕ∫