Page 185 - วารสารการแพทย์แผนไทย ปีที่ 21 ฉบับที่ 2

J Thai Trad Alt Med Vol. 21 No. 2 May-Aug 2023 401

earity) และช่วงการวิเคราะห์ (range) ความยาวคลื่น 366 นาโนเมตร และน�ามาอ่านแผ่น
ชั่งสารมาตรฐานฟริเดลีน น�้าหนัก 10 ด้วยเครื่องตรวจอ่านแผ่นโครมาโท-กราฟีผิวบาง น�า

มิลลิกรัม ละลายและปรับปริมาตรด้วยคลอโรฟอร์ม ค่าพื้นที่ใต้พีค (area under curve, AUC) ที่ได้มา
จนครบ 10 มิลลิลิตร ด้วยขวดแก้ววัดปริมาตร จะ สร้างกราฟแสดงความสัมพันธ์ระหว่างพื้นที่ใต้พีคกับ
ได้ stock solution ของสารละลายสารมาตรฐาน ความเข้มข้นของสารละลายสารมาตรฐาน จะได้กราฟ

ฟริเดลีน เข้มข้น 1,000 ไมโครกรัม/มิลลิลิตร จากนั้น มาตรฐาน (standard curve) และค่าสัมประสิทธิ์
เจือจางให้ได้ 6 ระดับความเข้มข้น ตามล�าดับ ใส่ลง สหสัมพันธ์ (correlation coefficient, r) จากนั้น
ในขวดแก้ววัดปริมาตร ขนาด 5 มิลลิลิตร แล้วปรับ ท�าการวิเคราะห์ปริมาณฟริเดลีน ในสารละลาย

ปริมาตรด้วยคลอโรฟอร์ม จะได้ 6 ระดับความเข้ม ตัวอย่างสารสกัดรากกัญชา โดยน�าค่าพื้นที่ใต้พีคที่ได้
ข้น คือ 25.99, 51.98, 103.95, 207.90, 415.80 และ เทียบกับกราฟมาตรฐาน
831.60 ไมโครกรัม/มิลลิลิตร 2.2.2 การทดสอบหาร้อยละของการคืนกลับ

น�าสารละลายตัวอย่างสารสกัดและ (% recovery) และความเที่ยง (precision)
สารละลายสารมาตรฐานฟริเดลีน มาหยดบนแผ่น เตรียม sample blank (sample blank

เคลือบซิลิกาเจลในแนวระดับเดียวกัน ให้เป็นแถบ คือ ตัวอย่างรากกัญชาที่น�ามาสกัดและตรวจวิเคราะห์
(band) ขนาด 6 5 0.45 มิลลิเมตร ด้วยเครื่องหยด หาปริมาณฟริเดลีน แล้วมีปริมาณสารฟริเดลีนใน
สารตัวอย่าง โดยหยดสารละลายตัวอย่างสารสกัด ปริมาณต�่า ๆ โดย ชั่งตัวอย่างรากกัญชา 2 กรัม สกัด

จ�านวน 1 แถบ ปริมาตร 15 ไมโครลิตร (วิเคราะห์ 3 ด้วยเฮกเซน โดยวิธีรีฟลักซ์ เป็นเวลา 60 นาที กรอง
ซ�้า) และสารละลายสารมาตรฐาน 6 ระดับความเข้มข้น ผ่านกระดาษกรองเบอร์ 4 น�าสารละลายที่ได้ไประเหย

ปริมาตร 10 ไมโครลิตร ตามล�าดับ (ทุกระดับความ แห้งด้วยเครื่องระเหยสุญญากาศ จากนั้นละลายและ
เข้มข้นวิเคราะห์ 3 ซ�้า) โดยให้ห่างจากขอบล่างประมาณ ปรับปริมาตรด้วยคลอโรฟอร์ม จนครบ 5 มิลลิลิตร
1.5 เซนติเมตร และให้มีระยะห่างระหว่างสารละลาย โดยใช้ขวดแก้ววัดปริมาตร น�าสารละลายตัวอย่างที่ได้

แต่ละชนิดไม่น้อยกว่า 0.5 เซนติเมตร จากนั้นน�าแผ่น ไปวิเคราะห์ด้วยเครื่องเดนซิโทมิเตอร์โครมาโทกราฟี
โครมาโทกราฟีผิวบางดังกล่าวมาจุ่มลงในแทงค์ ซึ่ง ผิวบาง จ�านวน 6 ซ�้า แล้วน�ามาหาค่าเฉลี่ย (mean)
อิ่มตัวด้วยวัฏภาคเคลื่อนที่ ซึ่งเป็นสารละลายผสม การเตรียม spiked sample ลงใน sample

ของโทลูอีนและคลอโรฟอร์มในอัตราส่วน 9:1 น�ามา blank โดยเติมสารละลายมาตรฐานที่ความเข้มข้น 3
ใส่ในแทงค์ ทิ้งไว้อย่างน้อย 1-2 ชั่วโมง ก่อนใช้ เพื่อ ระดับ ๆ ละ 3 ซ�้า ฉีดซ�้าละ 2 ครั้ง โดยเตรียม spiked
ให้บรรยากาศในแทงค์อิ่มตัว รอจนวัฏภาคเคลื่อนที่ sample ให้มีความเข้มข้น 50, 100, 150%

เป็นระยะทาง 8 เซนติเมตร จึงน�าแผ่นโครมาโทกราฟี เติมสารละลายสารมาตรฐานที่ความเข้มข้น
ผิวบางออก ตั้งทิ้งไว้ที่อุณหภูมิห้องให้แห้ง แล้วจึงน�า 3 ระดับ ลงใน sample blank แล้ววิเคราะห์ sample

แผ่นเคลือบซิลิกาเจลไปพ่นด้วยสารละลายทดสอบ blank (unspiked) จ�านวน 6 ซ�้า และวิเคราะห์ spiked
วานิลลิน-กรดซัลฟูริก ให้ความร้อน 110˚ซ นาน 5 sample ระดับละ 3 ซ�้า จากนั้นค�านวณค่าร้อยละของ
นาที แล้วตรวจสอบภายใต้แสงอัลตราไวโอเลตที่ การคืนกลับ